hiv耐藥性檢測在臨床實踐中的使用

1、國外醫(yī)藥抗生素分冊2010年第31卷第2期7lHIV耐藥性檢測在臨床實踐中的使用陳林編譯(中國醫(yī)藥集團四川抗菌素工業(yè)研究所，成都610052)摘要：現(xiàn)今耐藥性基因型檢測法成為HIV控制領域普遍關注的問題。雖然已經(jīng)公布了清晰的應用指南來引導恰當?shù)厥褂眠@些檢測法，臨床醫(yī)生和科學家們仍然努力想要在有限的預算和時間的約束下決定HIV耐藥性檢測的最優(yōu)用法。這篇文章主要針對一些實際的臨床案例展開討論，其目標是為了深入了解何時、何處能夠將耐藥基因型檢

2、測最有效地應用于HIV陽性成人患者。關鍵詞：人免疫缺陷病毒；基因型；耐藥基因型檢測中國分類號：R9787文獻標識碼：A文章編號：10018751(2010)02—007104近25年來，由于抗逆轉錄病毒聯(lián)合療法(cART)的顯著發(fā)展，使得HIV感染在發(fā)達國家由一種非常致命的疾病轉變?yōu)橐环N可控制的慢性感染。然而，盡管抗逆轉錄病毒聯(lián)合療法發(fā)展迅速，由于毒性問題、需要長期的藥物依從性、藥理因素以及耐藥病毒的進化和轉移，均導致該療法對部分患者始

3、終無法達到治愈目標。不管導致病毒失控的原因是什么，一個事實不容置疑：即如果在采用某種藥物治療的情況下發(fā)生了病毒復制，耐藥病毒的選擇性就會發(fā)生。采用病毒敏感的抗逆轉錄病毒聯(lián)合療法的主要目的是為了最大限度和持久地抑制病毒復制。若達不到這一目標，將會造成病毒變種的發(fā)展，這種情況的出現(xiàn)和更低的生存率有顯著聯(lián)系。一項研究結果表明，與已感染HIV的患者比較，診斷為多藥耐藥感染者的死亡概率較HIV感染者高出3倍。2006年，52％曾接受治療的患者都表

4、現(xiàn)出一定程度的耐藥性。所幸這個數(shù)字在最近幾年正在持續(xù)下降，一部分原因是由于對有效聯(lián)合療法的改進，也因為人們對HIV耐藥性更深入的了解，以及隨后臨床醫(yī)生選擇治療方案時所作的修正，避免使用某些藥物和聯(lián)合用藥。英國、美國和歐州頒發(fā)的HIV治療指南均支持對HIV陽性患者進行耐藥性檢測。盡管如此，對耐藥性試驗的解釋和最優(yōu)應用有時還會引發(fā)不確定事件。經(jīng)常使用耐藥性檢測技術的HIV醫(yī)生和病毒學家們認為，具有臨床指導功能的耐藥性檢測是優(yōu)化治療的一種無價

5、工具。然而，其推論也是正確的：不明智地、胡亂地使用這些技術并不經(jīng)濟實惠，而且其結果可能會是誤導而并非協(xié)助醫(yī)生作出臨床決定。本文的討論范圍僅局限于耐藥基因型檢測，因其是在英國使用的主要方法，表型試驗只用于少數(shù)經(jīng)歷長期治療的患者。1何時耐藥性檢測的臨床使用量最大11基線耐藥性檢測目前使用的治療指南推薦在抗逆轉錄病毒聯(lián)合療法之前進行“基線”耐藥性檢測。在英國，耐藥性的轉移(TDR)的發(fā)生率約為67％。然而，由于各個診所的HIV患者群體不同，故

6、診所和診所之間的區(qū)域性發(fā)病率也不同。在英國，與其同性發(fā)生性關系的男性發(fā)生耐藥性轉移的比率通常比哈薩拉以南非洲的HIV感染者更大，盡管這種趨勢可能會由于逆轉錄病毒療法的進一步普及而有所改變。健康經(jīng)濟學研究顯示，基線耐藥試驗在耐藥性轉移發(fā)生率超過5％時是一項經(jīng)濟實惠干預。靠近原發(fā)感染時檢測到TDR的可能性最高(圖1a)。原發(fā)感染之后，可測到的耐藥變株數(shù)量會隨時間的推移而快速減少，通過其在整個病毒種群中的比例表現(xiàn)出來。那些選擇延遲基線耐藥性檢

7、測直到首次治療時的臨床醫(yī)生可能會錯過檢測到轉化時獲得耐藥性病毒的檢測機會。另外，在實驗室的運作中，有關對HIV血漿樣本的保存期限方面存在很大的差異，而這些差異可能會妨礙對所保藏樣本的回顧性試驗。因此，建議對所有新確診患者進行基線耐藥水平檢測，即檢測距原發(fā)感染時間最近的血漿樣本的耐藥性。如果在傳染(原發(fā)感染)時或者接近傳染時未取得樣本，那么用最早儲存的樣本進行檢測仍然合適。這是由于最近才弄清某些傳染性突變株可以存活至少2~3年，甚至更長，

8、即使在未使用抗逆轉錄病毒療法(ART)的情形下。這些TDR突變株通常代表國外醫(yī)藥抗生素分冊20104E第31卷第2期該給臨床醫(yī)生以警示，即患者可能已經(jīng)被由于抗逆轉錄病毒療法而誘導產(chǎn)生的耐藥病毒感染。任何患者，只要顯現(xiàn)出其攜帶有發(fā)生了基因型突變或多態(tài)性的病毒，通常都預示其產(chǎn)生了耐藥性，都應該在抗逆轉錄病毒療法開始后采取監(jiān)控措施，以防耐藥性轉移病毒水平在傳統(tǒng)可檢測水平之下。某些HIV耐藥突變~I]K103N的復制能力與非耐藥病毒株相比并未明

9、顯減弱，因此其可能與非耐藥病毒在一個新染病的患者體內共存，或者一起轉移到一個新染病的患者體內。近期研發(fā)的更加靈敏的耐藥性檢測技術顯示：K103N或者Y181C突變病毒的低水平轉移可能比以前所認為的更加普遍。而且，病毒的這種低水平轉移可能是早期病毒檢測失敗的原因所在(即采用標準的耐藥性檢查方法不能測出其基線耐藥水平)。當前在使用核苷或非核苷逆轉錄酶抑制劑以及蛋白酶抑制劑時推薦進行基線耐藥性檢測。隨著整合酶抑制劑的使用范圍增大，更多對該類藥

10、物有耐藥性的患者治療失敗，因此針對整合酶抑制劑耐藥性的基線測試也可能對治療有益。12開始或重新開始cART治療后的臨床應答反應不佳某些低于基因型耐藥監(jiān)測下限的TDR變種可能只有使用更加靈敏的分析方法如等位基因特異性聚合酶鏈反應技術(ASPCR)才能檢測出來。只可惜這種ASPCR技術并非適合常規(guī)使用。因此，研究人員采用了一種實用的方法，即對那些未表現(xiàn)出足夠病毒載量反應的患者維持高懷疑度指數(shù)，而且在早期使用的標準基因型耐藥性檢測時保持低閾值

11、。就一般規(guī)律而言，一個患者在接受24周的cART治療后，其體內的HIV病毒載量減少的期望值應為2log。該研究還發(fā)現(xiàn)，未達到該期望值的患者在治療第4周時可能會通過耐藥性檢測發(fā)現(xiàn)少量的耐藥突變，但是這些突變只有在選擇性藥物壓力下才能被檢出。這樣就能允許在病毒對cART治療方案中的其他藥物產(chǎn)生耐藥性之前贏得在治療早期轉換藥物的時間。當然，應答反應不足會促使臨床醫(yī)師考慮與某種欠佳的病毒學應答有關的其他因素，而耐藥性只是其中一種。13發(fā)生病毒載

12、量反彈后應采取的措施對于接受cART治療且病毒載量被完全抑制的患者，應該每隔3～4個月進行一次評估，并檢測其病毒載量。在眾多關于病毒失控的解釋中，耐藥性的發(fā)展對之后治療成功與否的影響最為巨大。病毒在持續(xù)給藥的環(huán)境下進行復制會進一步導致耐藥突變的積累，而這自然會影響到以后的治療方案選擇范圍。因此，一旦檢測到耐藥性，修正ART治療方案對治療成功與否十分重要。該研究組制定的方案是：當治療中連續(xù)樣本(間隔2周)的病毒載量上升到400copies

13、／mL以上時，就對患者進行耐藥性檢測，而不是如許多早期治療指南所推薦的直到病毒載量超過1000copies／mL時才進行耐藥性檢測。14對于有復雜治療史病人的治療決定：用積累抗藥性解釋。許多在20世紀90年代開始接受ART治療方案的患者都使用1種或2種藥物療法，而新開發(fā)的藥物種類通常在治療失敗的情形下才會使用。許多患者還曾廣泛暴露于非增強的PIs，以至于很大一部分患者產(chǎn)生了對三類藥物(NRTI，NNRTI，PI)的廣泛耐藥性?；蛐湍退?/p>

14、性試驗對于有三重耐藥性的患者來說作用是無價的，其有助于設計一種盡可能含有多種活性藥物的有效新方案(通常與其他類型中較新的藥物聯(lián)用)。當患者正在接受ART療法時，耐藥性檢測在分析病毒學失敗中最為有用。由于正在使用藥物而產(chǎn)生的選擇性壓力使得耐藥性變異(如果存在的話)被檢出的可能性更大。~I]TDR中的情況：在缺少藥物作用的環(huán)境下，耐藥病毒或有記載突變的水平可能低于傳統(tǒng)基因型耐藥性測試的下限(圖lb)。研究表明，對于慢性感染且已發(fā)生耐藥性變異

15、的個體停止使用藥物療法，突變病毒通常在2周之內就從種群中消失了(圖lb)。這與上面所述的TDR感染者的情況恰恰相反。因此，當患者接受藥物治療過程中表現(xiàn)出病毒學失敗時即對其樣本進行耐藥性檢測顯得至關重要。研究中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，這對于患者正在服用一種特定藥物或一類藥物并在檢測出病毒血癥時的某些時間點獲取的血漿樣本(經(jīng)過儲存)進行回溯性試驗十分有用。而且，也告知研究人員病毒反彈是否和耐藥性有關，同時還可能推斷出在停止使用某藥物或某一類藥物之前的最高

16、耐藥水平是多少。一旦出現(xiàn)耐藥突變，就會將其儲存在T記憶細胞中。之后，這些突變可能被下一階段使用的某種特定藥物重新選擇。鑒于此，研究人員在選擇一種新方案的時候使用積累耐藥性分析。這種分析方法是通過混合患者先前的耐藥性檢測中獲得的所有耐藥突變，并采用在線耐藥性分析算法，如斯坦福大學主持的以規(guī)則為基礎的分析算法(wwwhivdbstanfordedu)，對這些突變進行重新分析。確信這些積累的耐藥性分析涵蓋了患者在以前和現(xiàn)在有記載的所有可能的耐