1.糖皮質(zhì)激素對(duì)巨噬細(xì)胞h,2s生成的調(diào)節(jié);2.內(nèi)毒素耐受導(dǎo)致腎上腺功能不全的機(jī)制

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文1.糖皮質(zhì)激素對(duì)巨噬細(xì)胞HS生成的調(diào)節(jié);2.內(nèi)毒素耐受導(dǎo)致腎上腺功能不全的機(jī)制姓名：劉書(shū)娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：倪鑫;朱曉燕20100501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文量檢測(cè)結(jié)果也顯示巨噬細(xì)胞能夠產(chǎn)生內(nèi)源性的H 2 S 。2 ．熒光實(shí)時(shí)定量P C R 和w e s t e r n b l o t 結(jié)果顯示內(nèi)毒素L P S 能夠劑量依賴性地誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)C S E 的m R N A 和蛋白表達(dá)。H 2

2、 S 的實(shí)時(shí)定量檢測(cè)結(jié)果也顯示L P S 能夠顯著增加內(nèi)源性H 2 S 的生成。提示在革蘭氏陰性菌導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)中，巨噬細(xì)胞是內(nèi)源性H 2 S 生成的來(lái)源之一。3 ．一氧化氮測(cè)定和w e s t e r n b l o t 結(jié)果顯示H 2 S 的前體L ．半胱氨酸( L ．c y s t e i n e )和外源性的H 2 S 供體N a r i s 均顯著抑制了L P S 誘導(dǎo)的N O 的生成和誘導(dǎo)性一氧化氮合酶( i n d u c

3、 i b l e n i t r i c o x i d e s y n t h a s e ，i N O S ) 表達(dá)，而C S E 。的抑制劑D L - p r o p a r g y l g l y c i n e ( P A G ) 貝J J 顯著阻斷了L 一半胱氨酸的作用。用s i R N A 阻斷C S E 基因表達(dá)能顯著促進(jìn)L P S 誘導(dǎo)的N O 生成和i N O S 表達(dá)，而C S E 過(guò)表達(dá)則能顯著抑制L P S 誘

4、導(dǎo)的N O 生成和i N O S 表達(dá)。提示H 2 S 可能可以通過(guò)抑制N O 生成而發(fā)揮抗炎作用。二、糖皮質(zhì)激素對(duì)H 2 s 生成的調(diào)節(jié)及機(jī)制1 ．熒光實(shí)時(shí)定量P C R 、w e s t e r n b l o t 、H E S 檢測(cè)、N O 檢測(cè)結(jié)果顯示，地塞米松能夠劑量依賴性地抑制L P S 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)C S Em R N A 和蛋白表達(dá)及H 2 S 生成量，同時(shí)也能顯著抑制i N O S 蛋白表達(dá)及N O 生成量。提示這

5、一作用可能是糖皮質(zhì)激素在炎癥過(guò)程中調(diào)節(jié)促炎、抗炎平衡的重要機(jī)制之一。2 ．熒光實(shí)時(shí)定量P C R 、w e s t e r nb l o t 、H 2 S 檢測(cè)結(jié)果顯示N O 前體L ．精氨酸( L ．a(chǎn) r g i n i n e ，L ．a(chǎn) r g ) 劑量依賴性地促進(jìn)L P S 誘導(dǎo)的C S E 表達(dá)和H 2 S 生成，而N O S抑制劑^ 7 U —n i t r o ．La r g i n i n em e t h y le

6、s t e r ( L 小『A M E ) 則劑量依賴性地抑制L P S 誘導(dǎo)的C S E 表達(dá)和H 2 S 生成。提示地塞米松可能通過(guò)抑制N O 生成而間接抑制C S E 表達(dá)和H 2 S 生成。3 ．熒光實(shí)時(shí)定量P C R 、w e s t e r nb l o t 、H 2 S 檢測(cè)結(jié)果顯示，在L ．N A M E 存在時(shí)地塞米松仍然能夠顯著抑制L P S 誘導(dǎo)的C S E 表達(dá)和H 2 S 生成。提示地塞米松還可以通過(guò)不依賴于N

7、 O 的方式直接抑制C S E 表達(dá)和H 2 S 生成。4 ．熒光實(shí)時(shí)定量P C R 結(jié)果顯示地塞米松使原代腹腔巨噬細(xì)胞C S Em R N A 穩(wěn)定性顯著降低。我們以往熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)的結(jié)果顯示地塞米松顯著抑制R A W 2 6 4 ．7 巨噬細(xì)胞中L P S 誘導(dǎo)的C S E 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄激活。提示糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)不同的機(jī)制抑制原代巨噬細(xì)胞和巨噬細(xì)胞系的C S E 表達(dá)，G C s 對(duì)C S E 表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制可能具有細(xì)胞特異性