基因疫苗pcdna3.0psma抑瘤效應(yīng)及免疫機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文基因疫苗pcDNA3.0-PSMA抑瘤效應(yīng)及免疫機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究姓名：汪波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：曹開源20060429中山大學(xué)2 0 0 3 級(jí)碩士學(xué)位論文苗在荷瘤小鼠模型中的抑瘤效應(yīng)及誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的特征，為前列腺癌基因疫苗研究拓展了新思路，同時(shí)也為前列腺癌的預(yù)防和免疫治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。方法一：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將P S M A —p c D N h 3 ．O 質(zhì)粒和D c D N

2、 A 3 ．0 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至S P 2 ／O細(xì)胞，G 4 1 8 篩選后獲得了穩(wěn)定生長的陽性克隆細(xì)胞抹，R T —P C R ，間接免疫熒光法，w E S T E R N B L O T 檢測P S M A 蛋白的表達(dá)。二：將B A L B ／c 小鼠分為免疫組和對(duì)照組，免疫組肌注P s M A —p c D N A 3 ．0 質(zhì)粒，對(duì)照組肌注p c D N A 3 ．0 質(zhì)粒進(jìn)行免疫，共免疫4 次，免疫后2 周將S P 2 ／O —P

3、S M A 腫瘤細(xì)胞皮下注入小鼠，建立荷瘤小鼠模型，通過比較空載組與免疫組小鼠的腫瘤形成與破潰時(shí)間，成瘤率，腫瘤大小，平均瘤重，生存率觀察P S M A —p c D N A 3 ．0基因疫苗的抗瘤效應(yīng)。三：將B A L B ／c 小鼠分為免疫組和對(duì)照組，免疫組肌注P S M A - p c D N A 3 ．0 質(zhì)粒，對(duì)照組肌注p c D N A 3 ．0 質(zhì)粒，共4 次，提取每次免疫后兩周小鼠的血清和脾淋巴細(xì)胞，對(duì)血清抗體和脾淋巴細(xì)

4、胞的增殖和殺細(xì)胞毒效應(yīng)進(jìn)行觀察來探討抑瘤效應(yīng)的免疫學(xué)機(jī)制。結(jié)果一：R T —P C R ，間接免疫熒光法和W E S T E R N B L O T 均證明成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)P S M A 小鼠腫瘤細(xì)胞模型。= ：成功構(gòu)建了荷瘤小鼠模型?？蛰d組小鼠腫瘤形成與破潰時(shí)間為1 0 天與2 2 天，成瘤率為1 0 0 ％，平均瘤重達(dá)8 ．3 2 8 ±1 ．3 2 克，腫瘤生長迅速，生存率低。免疫組小鼠腫瘤形成與破潰時(shí)間為1 5 天和