多靶點(diǎn)復(fù)合抗原抗腫瘤基因疫苗抑瘤活性的初步研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文多靶點(diǎn)復(fù)合抗原抗腫瘤基因疫苗抑瘤活性的初步研究姓名：賈銳申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：范明于繼云20070510中文摘要多靶點(diǎn)復(fù)合抗原抗腫瘤基因疫苗抑瘤活性的初步研究中文摘要抗腫瘤基因疫苗是一種調(diào)節(jié)免疫功能的生物治療劑，因其能誘發(fā)有效及持久的免疫反應(yīng)而被廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤的免疫治療。首先，本研究將人GMCSF、B71串聯(lián)構(gòu)成融合基因GM／B7，插入真核表達(dá)載體pVAXlIRES中IR

2、ES元件的下游后，成功構(gòu)建了可以表達(dá)人GMCSF、B71免疫協(xié)同增效分子的雙順反子真核表達(dá)載體pVAXlIRESGM／B7。其次，以腫瘤細(xì)胞高表達(dá)的廣譜性特異抗原凋亡抑制蛋白Survivin和絨毛膜促性腺激素hCGl3鏈的核心蛋白CTP37為研究靶點(diǎn)，將Survivin的主要抗原表位區(qū)域和人、猴的CTP37基因串聯(lián)，構(gòu)成異種化復(fù)合抗原2PAG。再次，構(gòu)建了含有人IgK鏈前導(dǎo)信號肽(sig)、復(fù)合抗原2PAG與人IgGFc段和糖基磷脂酰肌

3、醇(GPI)錨定信號肽的融合基因sig2PAGFeGPI(簡稱2PAGFeGPI)，將其插入pVAXlIRES—GM／B7載體中II迮S的上游，成功構(gòu)建多靶點(diǎn)復(fù)合抗原抗腫瘤基因疫苗pVAXlsig2PAG—FcGPI—GM／B7(簡稱pVAXl—2PFeGB)。實驗結(jié)果顯示該疫苗中的2PAGFcGPI融合基因和GM倡7融合基因可在真核細(xì)胞中共表達(dá)。最后，在表達(dá)相應(yīng)腫瘤抗原的小鼠乳腺癌EMT6荷瘤模型中檢驗了所構(gòu)建的基因疫苗對腫瘤的治療效

4、果，并通過ELISA和CTL殺傷實驗檢測該疫苗激發(fā)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的體液及細(xì)胞免疫情況。結(jié)果顯示，該疫苗可在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生良好的體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗原特異性抗體，其抗體滴度為1：6400；同時也誘導(dǎo)產(chǎn)生了強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫應(yīng)答，在效靶比為60：1、30：1和15：1時，CTL的殺傷率分別為6874％、4439％和3099％。在對腫瘤的治療實驗中，提前5天用EMT6細(xì)胞對小鼠進(jìn)行皮下移植瘤攻擊，經(jīng)該疫苗免疫治療后，與對照組相比，小鼠體內(nèi)腫瘤的平