小分子抗癌肽aurein1.2在栗酒裂殖酵母中表達(dá)的研究

1、重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文小分子抗癌肽Aurein1.2在栗酒裂殖酵母中表達(dá)的研究姓名：侯曉姝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：陳國平20090603重慶人學(xué)碩士學(xué)位論文 英文摘要A B S T R A C TA n t i m i c r o b i a l p e p t i d e s ，ac l u s t e ro fs m a l l p e p t i d e s s e c r e t e db yt h em a

2、 j o r i t yo fc r e a t u r e s ，h a v eb e e n d e m o n s t r a t e d w i t ha c t i v i t ya g a i n s t a w i d e r a n g e o f m i c r o o r g a n i s m si n c l u d i n g b a c t e r i a ，p r o t o z o a ，y e a s

3、t ，f u n g i ，v i r u s e sa n d e v e nt u m o r c e l l s ．T h e y p a r t i c i p a t ep r i m a r i l y i nt h e i n n a t ei m m u n e s y s t e m a n d a r e u s e da sa f i r s tl i n eo f i m m u n e d e f e n s

4、e b ym a n yo r g a n i s m s ．T h e s e p e p t i d e s h a v es o m ef e a t u r e s s u c h a sb r o a d s p e c t r u m ，h i g he f f i c a c ya n ds t a b i l i t y , l i t t l e d r u gr e s i s t a n c e ．I th a s

5、b e e np r o p o s e dt h a tt h ea n t i m i c r o b i a lp e p t i d e s m i g h t f o r m t h e f o u n d a t i o n f o r a n e w c l a s s o f c l i n i c a l l y u s e f u la n t i m i c r o b i a l s ．T h ea u r e

6、i nf a m i l y f r o mL i t o r i a a u r e a s h o w s w i d e —s p e c t r u ma n t i b i o t i ca n da n t i c a n c e ra c t i v i t y ，A m o n g s t t h em o r ea c t i v e p e p t i d e s a r ea u r e i n 1 ．2 ，a u

7、 r e i n 2 ．2 a n da u r e i n 3 ．1 ．T h e s e p e p t i d e ss h o w e d m o d e r a t ea n t i c a n c e ra c t i v i t y a g a i n s tm o r e t h a n9 0 ％o fa l lh u m a n C a n C e r c e l lt y p e s ．T h ea n t i c

8、a n c e r a c t i v i t yo f t h ea u r e i n s i so n l y m o d e r a t e ，w i t hL C 5 0v a l u e si n t h e1 0 - 5 —1 0 。4m o l a r r a n g e ( 1 x 1 0 —5 Mi se q u i v a l e n tt o 1 5 U g ·m L - 1 ) ．T h e yd o

9、 n o ta f f e c tr e d b l o o d c e l l sa tlO O B g ’m L - 1 ，t h em a x i m u m c o n c e n t r a t i o nr e q u i r e d t ok i l lb a c t e r i a la n d C a n C e r c e l l s ．T h ep r i n c i p a l r e a s o n w h y

10、 t h e p h a r m a c e u t i c a l i n d u s t r y h a s b e e nr e l u c t a n t t op r o m o t et h ec l i n i c a lu s e o f t h i s c l a s so f a n t i b a c t e r a lt h e r a p e u t i c s i st h eh i g hp r o d u

11、 c t i o nc o s to f p e p t i d e s ．T h ec o s tp r i c eo f s y n t h e t i cp e p t i d e si sf i v et o t w e n t yt i m e sa sh i g ha st h a t o fc o n v e n t i o n a l a n t i b i o t i c s ．w i t h ac o s t o f

12、 a b o u t $ 5 0 - 4 0 0p e r g r a m ．f a r t o oe x p e n s i v ef o re v e r y d a yu s a g ei n l e s sd e v e l o p e dc o u n t r i e s ．S ot ’S a n u r g e n tn e e dt oe s t a b l i s h c o m m e r c i a l p r o

13、d u c t i o n p l a t f o r m ．M a n yr e s e a r c h e r s a r e w o r k i n go nt h i sp r o b l e m b y r e d u c i n g t h e p e p t i d e s i z e o r u s i n g r e c o m b i n a n t e x p r e s s i o n i nm i c r o

14、o r g a n i s m s ．I nt h i s s t u d y ，t h ea u r e i n 1 ．2 g e n ew a s s u c c e s s f u l l yc l o n e db yP C R w i t h2 p r i m e r sd e s i g n e d a c c o r d i n g t o t h ea m i m o a c i d s e q u e n c eo f

15、a n t i b a c t e r i a lp e p t i d ea u r e i n 1 ．2 a n dt h ec o d o n p r e f e r e n c eo f y e a s t ，a n dt h ee x p r e s s i o n v e c t o rW a s c o n s t r u c t e d b yl i g a t i n gt h ea u r e i n l ．2g e

16、 n e i n t o p E S P ·2v e c t o r ，w h i c hw a st h a n s f e r e di n t oS P —Q 0 1 ．t h e nt h ef u s i o np r o t e i nW a s e x p r e s s e d e f f i c i e n t l y , s t a b l ya n d a c t i v e l y ．A f t e r

17、 c e l l d i s r u p t i o n ，a f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h yp u r i f i c a t i o n ，t h ep r o t e i nW a s o b t a i n e da n d d e t e r m i n e db yp r o t e a s ea n dw e s t e r n b l o t i n g ．K e y w