2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、抗菌肽是廣泛存在于自然界生物體中的多肽,是生物體先天免疫的重要組成部分。因其具有抗菌活性強(qiáng)、廣譜抗菌、熱穩(wěn)定性及不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)而廣受人們的關(guān)注。 綿羊骨髓抗菌肽(SMAP-29)是1995年Bagella和Margherita Zanetti等研究小組在綿羊的骨髓mRNA中發(fā)現(xiàn)的,具有兩親性α-螺旋結(jié)構(gòu)域,屬于cathelicidins家族,含29個(gè)氨基酸殘基,有很強(qiáng)的抗細(xì)菌、真菌、中和內(nèi)毒素等生物學(xué)功能。 本研究

2、以GenBank發(fā)表的SMAP-29基因(L46854)為模板,參照畢赤巴斯德酵母(Pichia pastotls)密碼子偏好性,設(shè)計(jì)合成了抗菌肽SMAP-29成熟肽目的基因片段。通過基因重組的方法將合成的基因克隆入pPIC3.5K載體中構(gòu)建重組酵母胞內(nèi)表達(dá)載體pPIC3.5K-SMAP-29,經(jīng)酶切分析、PCR和測(cè)序鑒定證明載體構(gòu)建成功。將構(gòu)建成功的載體電擊轉(zhuǎn)化至畢赤酵母受體菌GS115中,經(jīng)G418篩選高拷貝轉(zhuǎn)化子,并用MM、MD板

3、和PCR法篩選Mut+表型。對(duì)構(gòu)建好的重組酵母表達(dá)基因工程菌用甲醇誘導(dǎo)表達(dá),裂解酵母細(xì)胞進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE分析,結(jié)果在誘導(dǎo)至第2天的細(xì)胞裂解液中檢測(cè)到與預(yù)測(cè)的SMAP-29分子量相當(dāng),約為3.2KD的表達(dá)帶。Trizol法提取酵母總RNA,通過RT-PCR擴(kuò)增SMAP-29 mRNA,發(fā)現(xiàn)表達(dá)期的酵母細(xì)胞中存在SMAP-29 mRNA,而對(duì)照沒有檢出,表明SMAP-29在畢赤酵母中存在表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)凝膠過濾色譜處理后

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