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1、南京師范大學(xué)碩士學(xué)位論文芽孢桿菌胞外高豐度蛋白的分離測(cè)序和表達(dá)元件的克隆分析姓名:龔蕾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:董宏平20080528AbstractTheobjectiveofthisresearchistOclonetheexpressionelementofamajorsecretoryproteingenefromBacillusspJKIThestraininthisresearchwasisolatedfro
2、mfungithattreatedblue—greenalgaeonTaihuLakeIdentificatedbymorphologicalcharacteristics,biologgram—positive(GN)assayand16SrRNAgeneamplificationBecauseoftheincertituderesultofbiolog,thestrainWaSdesignatedaSBacillusspJK1Int
3、heSalTletime,twostrainsisolatedfromrabbitexcretawereidentificatedasBacillusmegateriumRF3andBacillusmegateriumRF5SDS—PAGEanalyzingthesecretoryproteinsofBacillusspJKlshowedthatthereweretwomajorbandsOnewassmallerthan144KDa;
4、anotherWaSabout18KDamarked鵲P1andP2,respectivelyTransformedP1andP2tOPVDFmembraneandtookN—terminalsequencingP1sequencingunsuccessfullyResultofP2was嬲f(shuō)ollows:ASVEDFSNYEAfterNCBIblaSt,nohomologousproteinWaSfoundRSD—PCRWaSused
5、tOcloningupstreamanddownstreamsequencesEightspecificfragmentswereclonedmarkedaSU1,U2,U3,U4,U5,U6,U7andD1,respectivelyButnooneWaSaimFragmentU3WaSbiotinsynthesisproteinU5WasNrdGandQueEBothoffragmentsU6andU7WaSCrcBFragmentD
6、1showed100%aminoacididentitywitllosmoticshockprotectionproteinThewholeoresYis685bp,andcalculatedproteinweightis23KDaSequenceanalysisshewthereWaSasignalpeptideintheNterminalThesequence“SNYE’insignalpeptideWasthesame觴“SNYE
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