藍(lán)藻synechocystissp.pcc6803轉(zhuǎn)抗菌肽cm4基因質(zhì)粒的構(gòu)建

1、南京師范大學(xué)碩士學(xué)位論文藍(lán)藻Synechocystis sp.PCC6803轉(zhuǎn)抗菌肽CM4基因質(zhì)粒的構(gòu)建姓名：韓嵐申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：李建宏20060517南京師范大學(xué)碩士學(xué)位論文 藍(lán)藻S y m c h o c y s t i ss p 、P C C 6 9 0 3 轉(zhuǎn)抗菌肽C M 4 基因質(zhì)粒的構(gòu)建A b s t r a c tS y n e c h o c y s t i ss p ．P C C 6 8 0

2、3 i sa u n i c e l l u l a r c y a n o b a c t e r i u m t h a ti sa b l e t og r o we i t h e ra u t o t r o p h i c a l l yo rh e t e r o t r o p h i c a l l yo n g l u c o s e ．I t ’san a t i v ec o m p t i t e n tc e

3、 l la n d n a t u r a l l y t r a n s f o r m a b l e b y e x o g e n o u s D N A ．C y a n o b a c t e r i a ，a st h e r e c e p t o ro fg e n e —t r a n s f o r m i n gs y s t e ma n d a st h e b i o l o g y r e a c t o

4、 r , s h o w m e r i t so f m i c r o b e a n dp l a n t c o n c u r r e n t l y ．T h u st h es t u d i e so nc y a n o b a c t e r i a a st h er e c e p t o ro f g e n ee n g i n e e r i n g a n d t h e i re x p r e s s

5、 i o n o f f o r e i g np r o t e i n e n j o y sg r e a t s i g n i f i c a n c e i nb o t ht h e o r e t i c a la n d a p p l i e df i e l d s ．A n t i m i c r o b i a lp e p t i d eC M 4 ，i s o l a t e d f r o m t h e

6、 s i l k w o r mb o m b y xm o r i ．p u p a e ，i s t h ec o m p o n e n t w h i c h h a s t h es t r o n g e s t b i o l o g i c a la c t i v i t ya n di so f 3 5a m i n oa c i d s ．珊1 a t i sm o s t r e m a r k a b l ec

7、 h a r a c t e r i s t i ci s i t sw e l l 。d e f i n e da c t i v i t ya g a i n s ta w i d e v a r i e t yo f b a c t e r i a , f u n g i ，v i r u s e s ，p r o t i s ta n d s o m e t u m o r c e l l s ．I ti sr e p o r

8、t e dt h a ta n t i m i c r o b i a lp e p t i d eC M 4 c a n i n h i b i t e d t h e p a t h o g e n i cg e r m s i na q u l c u l m r e o f f i s h ．I n t h i s s t u d y ，w et r i e d t o c o n s t r u c t c o r r e s

9、 p o n d i n g e x p r e s s i o n v e c t o r a n di n t e g r a t i v e v e c t o r t o e x p r e s s a n t i m i c r o b i a l p e p t i d e C M 4i n S y n e c h o c y s t i s s p ．P C C 6 8 0 3 ．T h et r a n s g e n

10、e t i c c o u l db eu s e da sa q u a t i cf e e d ．T h a tc o u l dp u t f o o d a n dm e n d i c i n e t o g e t h e r ．F u r t h e r m o r e ，t h es t u d y a l s oo f f e r e d a l li d e a l l y a p p r o a c h t or

11、 e s o l v et h ec o n t r a d i c t i o nb e t w e e n p r e v e n t i o na n d c u r ea q u a t i cp r o d u c t s ’d i s e a s e sa n d d e c r e a s et h eu s eo f a n t i b i o t i c s ，w h i c hw e c o u l dg e t h

12、 u g eb e n e f i t so f e c o n o m y a n d e n t i r o n m e n tf r o m i t ．T h u si th a s p a v e d t h ew a y f o rf u r t h e r e x p l o i t a t i o no f t r a n s g e n i cc y a n o b a c t e r i a ．T h e e x p

13、e r i m e n t b e g i n sw i t h t h ef u l ls e q u e n c e o f a n t i m i c r o b i a l p e p t i d e sC M 4g a i n e d b y t w i c e P C R p r o c e s s ．T h e n P C R - a m p l i f i e d C M 4 g e n ea n d a n t i b

14、 i o t i cf r a g m e n tQ w h i c h a l s oc a r r i e dt r a n s c r i p t i o n t e r m i n a t e r a r er e s p e c t i v e l yi n s e r t e di n t oM C S( m u l t i p l e c l o n i n gs i t e s ) ，w h i c h i sl o c

15、 a t e da tt h ed o w n s t r e a m o f t h e p e t E p r o m o t e r i nt h es h u t t l e v e c t o rp B S —p p e t E a n d t h e r e c o m b i n e dv e c t o rp B S —p C Q t h a tc o n t a i n se x p r e s s i o nf r

16、a g m e n t p C f 2 ‘‘p e t Ep r o m o t e r - C M 4 g e n e - a n t i b i o t i c f r a g m e n t Q ”w a sf o r m e d ．T h e n t h es y n t h e t i c a le x p r e s s i o nf r a g m e n t p C Q i ss u b c l o n e da n d