蠟梅(chimonanthuspraecox(l.)link)lea蛋白基因cplea1和cplea2的克隆及原核表達(dá)研究

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文蠟梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）LEA蛋白基因Cplea1和Cplea2的克隆及原核表達(dá)研究姓名：馮曉昆申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：李名揚(yáng)20091101兩南大學(xué)碩十學(xué)何論文碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，得到其核酸和蛋白序列組成、蛋白質(zhì)疏水性、跨膜區(qū)、二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)、信號(hào)肽、磷酸化和糖基化位點(diǎn)等多種數(shù)據(jù)。然后擴(kuò)增同收目的基因片段。最后構(gòu)建原核表達(dá)載體建立原核表達(dá)體系。主要實(shí)驗(yàn)

2、結(jié)果如下：1 ．在構(gòu)建蠟梅e D N A 文庫(kù)及E S T 分析的基礎(chǔ)上，通過(guò)隨機(jī)克隆測(cè)序，克隆了2 個(gè)蠟梅L E A蛋白的e D N A 基因，命名為C p l e a l 和C p l e a 2 。C p l e a l 的編碼蛋白與毛果楊和蕪菁L E A 蛋白氨基酸序列相似性較高；C p t e a 2 的編碼蛋白與毛果楊和榛子L E A 蛋白氨基酸序列相似性較高。進(jìn)一步序列比較分析表明，C p l e a l 和C p l e

3、 a 2 是從蠟梅中克隆到的2 個(gè)編碼L E A 蛋白的基因。C p l e a l e D N A 基因全長(zhǎng)5 7 7 b p ，其中含有2 7 3 b p 的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)含有9 0 個(gè)氨基酸的L E A 蛋向；C p t e a 2e D N A 基岡全長(zhǎng)5 7 2 b p ，其中含有2 5 8 b p 的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)含有8 5個(gè)氨基酸的L E A 蛋白。2 ．運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析兩種目的基岡及其編碼蛋白的序列并預(yù)

4、測(cè)蛋白的結(jié)構(gòu)。分析結(jié)果顯示，兩種蛋白具有良好的親水性。C p L E A l 蛋白中A l a 、L y s 、G l n 、S e r 的含量最高，C p L E A 2蛋白中A l a 、G l n 、S e r 、T h r 的含量最高。兩種蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中均有人量的f t ．螺旋。兩種蛋白含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，推測(cè)翻譯后蛋白可能進(jìn)行多樣化修飾，這可能與L E A 蛋白功能的多樣化有關(guān)。3 ．將蠟梅C p l e a l 和C p