視黃酸對人m252;ller細(xì)胞抑制作用及其對mapk通路的影響

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文視黃酸對人müller細(xì)胞抑制作用及其對MAPK通路的影響姓名：張艷莉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：吳開力20060501碩士學(xué)位論文 視黃酸對人m u l l e r 細(xì)胞抑制作用及其對M A P K 通路的影響 中文摘要1 目的觀察R A 對體外培養(yǎng)的m u l l e r 細(xì)胞生長的效應(yīng)及其有效作用濃度和作用時(shí)間，以及對其細(xì)胞劇期和M A P K 信號通路的影響。2 方法2 ．1 細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)

2、蘇人m t l l l e r 細(xì)胞株一支，用含1 0 ％新生小牛血清的D M E M ／F 1 2 培養(yǎng)基在3 7 ℃含5 ％C 0 2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長并達(dá)到8 0 ％融合時(shí)，用o ．0 5 ％胰酶消化吹打制成單細(xì)胞懸液并傳代，供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。2 ．2 R A 的制備將R A 溶于D M S O 配制成1 0 。2 M 的儲(chǔ)存液，使用前角新鮮無血清培養(yǎng)基配制成不同濃度。0 ．0 0 1 ～1 0 0 “M 范圍內(nèi)R A 用

3、于初步觀察R A 對m u l l e r 細(xì)胞產(chǎn)生作用的數(shù)量級范圍，并根據(jù)以上結(jié)果選取較小濃度范圍的R A 進(jìn)一步觀察m t l l l e r細(xì)胞發(fā)生的改變以及其對R A 濃度的依賴性。2 ．3 倒置顯微鏡下觀察m u l l e r 細(xì)胞在R A 作用下的形態(tài)學(xué)改變；2 ．4M T T 法檢測R A 對m u l l e r 細(xì)胞的生長抑制作用；2 ．5H E 染色觀察R A 作用后凋亡m t l l l e r 細(xì)胞的形態(tài)改變；

4、2 ．6 細(xì)胞計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)R A 作用后殘留細(xì)胞數(shù)目；2 ．7 流式細(xì)胞術(shù)觀察R A 作用后m o i l e r 細(xì)胞的凋亡率以及細(xì)胞周期的改變；2 ．8 免疫細(xì)胞化學(xué)法( I m m u n o c y t o c h e m i s t r y ，I C C ) 和，或免疫印跡法( W e s t e r nB l o t ) 初步探討M A P K 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中E R K 、p 3 8 、P ．S A P K ／J N K 和A