布渣葉總黃酮苷的降脂活性及其芹菜素碳苷的定性定量分析.pdf

1、布渣葉是廣東習(xí)用地產(chǎn)藥材，“藥食同源”性植物，一直被廣泛的用于臨床治療與民間茶飲。自清朝起，嶺南本草書籍中就有關(guān)于“破布葉”清熱、解毒等藥效的記載，其后《嶺南采藥錄》、《陸川本草》等也均有記載。2010年后，各版《中華人民共和國(guó)藥典》將其收錄，可見其藥用價(jià)值已獲得充分的肯定。遺憾的是，目前布渣葉的使用價(jià)值大部分局限于涼茶等飲料的配制，其藥用價(jià)值很少得到發(fā)展。為了進(jìn)一步的研究和開發(fā)布渣葉資源，本文參考其他中藥類文獻(xiàn)和產(chǎn)品，對(duì)總黃酮部位進(jìn)行

2、提取、分離和純化，獲得MpTFF及碳苷黃酮單體；建立質(zhì)量規(guī)范，測(cè)定理化性質(zhì)；研究MpTFF的抗氧化、降脂活性及其降脂機(jī)制。
　　1.本文采用加熱、冷凝回流的方法提取布渣葉總黃酮部位，選用 AB-8型樹脂進(jìn)行有效成分富集。隨后應(yīng)用凝膠柱層析（葡聚糖凝膠 LH20）純化，使該部位的苷與苷元分離。最終，采用噴霧干燥技術(shù)（進(jìn)風(fēng)溫度210℃；噴霧空氣流量538L·h-1；抽氣機(jī)輸出85％；泵輸出10%）獲得MpTFF粉末。隨后，應(yīng)用LC-M

3、S技術(shù)結(jié)合對(duì)照品的精確分子量、相對(duì)保留時(shí)間以及MS和MSE的裂解模式對(duì)MpTFF中所含有的8種黃酮苷進(jìn)行定性分析，分別為：維采寧-2、異夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荊苷、維采寧-1、異牡荊苷、紫云英苷和水仙苷。
　　2.分別建立以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定總黃酮苷含量（55.73±0.65%）的比色法和同時(shí)測(cè)定8種黃酮苷成分的HPLC法—Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流動(dòng)相為甲醇（A）和水（含0.2%磷酸，B）

4、，流速為1mL·min-1。梯度洗脫程序:0～12min，82%→70%(B)；12～45min，70%→55%(B)；45～60min，55%→20%(B)；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm，柱溫為35℃。
　　二者結(jié)合可以為MpTFF提供更加科學(xué)的質(zhì)量控制。隨后，以搖瓶法測(cè)定MpTFF在水、pH6.8磷酸鹽緩沖液（PBS）和0.1moL·L-1鹽酸中的溶解度，分別為1.46±0.02（略溶）、7.48±0.07（溶解）和25.84±0.1

5、6g·100mL-1（易溶）。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，MpTFF在三種介質(zhì)中的溶解度，分別為鹽酸>PBS>水；究其原因可能是由于MpTFF的組成復(fù)雜，在酸或堿的環(huán)境中，彼此發(fā)生相互作用，增大了其溶解度。因此為了更加準(zhǔn)確的測(cè)定中藥成分的溶解度，則需要更加科學(xué)的溶解度測(cè)定方法。
　　3.采用體外清除DPPH自由基試驗(yàn)以及HLP小鼠的降脂試驗(yàn)對(duì)MpTFF的相關(guān)活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明其具有較好的清除自由基能力（EC50值為0.038mg·mL-

6、1），；以312 mg·(Kg·d)-1的劑量給藥，MpTFF能夠有效的降低HLP小鼠的體重增量，降低TC、TG和LDL-C水平，上升HDL-C水平。同時(shí)，對(duì)于AST和ALT兩種轉(zhuǎn)氨酶的活性水平也具有降低的作用，上述實(shí)驗(yàn)證明MpTFF具有一定的抗氧化、保肝和降脂活性。
　　4.采用計(jì)算機(jī)模擬分子對(duì)接的方法，對(duì)MpTFF降脂活性成分進(jìn)行了分析。首先，查閱相關(guān)文獻(xiàn)，下載與降脂相關(guān)的受體；然后，依據(jù)MpTFF所含成分建立配體數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行

7、CDOCKER模式的分子對(duì)接。結(jié)果表明，牡荊苷、異牡荊苷和紫云英苷等能夠與受體蛋白有較好的氫鍵連接。而該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相符，進(jìn)一步證明異牡荊苷、牡荊苷和紫云英苷等為MpTFF中主要的降脂活性成分。
　　5.以MpTFF為基礎(chǔ)進(jìn)一步進(jìn)行水解，采用凝膠柱層析、反相ODS柱色譜和半制備型HPLC進(jìn)行了碳苷黃酮的分離、純化；1H-NMR，13C-NMR和HRMS進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，最終鑒定了4種碳苷黃酮，分別為：維采寧-2、牡荊苷、異牡荊苷、異