巖黃連提取物抑制A549細胞F-actin形成及其可能機制.pdf

1、目的：
　　巖黃連提取物對A549細胞遷移及細胞骨架影響及其機制
　　方法：
　　體外無菌培養(yǎng)A549細胞，用四甲基偶氮唑藍比色法（MTT）檢測巖黃連提取物在不同濃度（1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L）分別作用48h和72h后對A549細胞生長的抑制情況。利用Wound healing實驗和 Transwell小室實驗，比較不同濃度巖黃連提取物作用后對A549細胞遷移能力的影響。不同濃

2、度巖黃連提取物（1mg/L、2.5mg/L、5mg/L）作用48小時后，用樁蛋白（Paxillin）一抗和鬼筆環(huán)肽羅丹明分別標記細胞黏著斑和纖維型肌動蛋白（F-actin）。利用免疫熒光技術(shù)觀察細胞形態(tài)變化。利用westernblot技術(shù)觀察不同濃度巖黃連提取物（1mg/L、2.5mg/L、5mg/L）作用48小時后，A549細胞內(nèi)Paxillin-1和絲切蛋白1（cofilin-1）表達水平及磷酸化水平差異。Si-RNA敲除Cdc42

3、后觀察A549細胞遷移能力變化以及MAPK蛋白表達水平變化。
　　結(jié)果：
　　MTT實驗顯示，分別用1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L巖黃連提取物處理48小時后，實驗組與對照組細胞生長情況無統(tǒng)計學差異。而分別用1mg/L、2.5mg/L、5mg/L巖黃連提取物處理72小時情況下，實驗組與對照組細胞生長情況無統(tǒng)計學差異。Wound healing和Transwell小室實驗顯示2.5mg、5mg/L巖黃連提取

4、物處理后可以抑制A549細胞遷移能力(P＜0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示隨著藥物濃度的增加F-actin在細胞內(nèi)集聚減少，而黏著斑在細胞表面增加。Westernblot結(jié)果顯示cofilin-1磷酸化水平降低(P＜0.05)，而cofilin-1表達水平、Paxillin-1表達水平、Paxillin-1磷酸化水平?jīng)]有差異。Si-RNA敲除Cdc42后，Wound healing顯示A549細胞遷移能力降低（P＜0.05）；MAPK蛋白表