夏枯草提取物對(duì)A549細(xì)胞蛋白質(zhì)組影響的研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)。由于抗腫瘤藥物毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性，影響了在臨床上的應(yīng)用。夏枯草(Prunella vulgaris L.)為唇形科夏枯草屬植物的干燥果穗，是一味傳統(tǒng)抗腫瘤中藥，其抗腫瘤作用是一個(gè)涉及多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的過程，調(diào)節(jié)這些過程的本質(zhì)是基因，而最直接的作用者是蛋白質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用雙向電泳技術(shù)和蛋白質(zhì)譜技術(shù)，分析肺腺癌A549細(xì)胞和夏枯草作用后A549細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)量或質(zhì)的

2、變化，從蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討夏枯草抗肺腺癌的作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)肺腺癌A549細(xì)胞，將其分成二組:正常對(duì)照組（不加夏枯草提取物）、實(shí)驗(yàn)組（夏枯草提取物用藥組）。采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度夏枯草提取物對(duì)腺癌A549細(xì)胞增殖抑制作用，找到最佳夏枯草提取物作用濃度。加入此濃度夏枯草提取物檢測(cè)不同作用時(shí)間下對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖活力的影響，找到最佳作用時(shí)間。以超聲裂解細(xì)胞法分別提取兩組細(xì)胞總蛋白，進(jìn)行蛋白質(zhì)雙向電泳

3、分離和凝膠硝酸銀染色，進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定。經(jīng)UMAX ImageScanner凝膠掃描儀及LabScan軟件進(jìn)行圖象掃描、Image Master2D Platinum6.0軟件對(duì)獲得的蛋白圖譜加以分析，尋找差異表達(dá)蛋白質(zhì)。切取差異蛋白表達(dá)點(diǎn)，經(jīng)膠內(nèi)酶解后，進(jìn)行基質(zhì)輔助激光電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析獲得肽指紋圖譜，用MASCOT軟件(Matrix Science Ltd.)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫搜索，得到差異蛋白質(zhì)信息。

4、　　結(jié)果：
　　夏枯草提取物可明顯抑制肺腺癌A549細(xì)胞的生長，且具有一定的量效關(guān)系。采用雙向電泳技術(shù)建立正常對(duì)照組及夏枯草提取物作用后肺腺癌A549細(xì)胞蛋白質(zhì)組圖譜，結(jié)果顯示:正常對(duì)照組3塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)為1585個(gè)，加藥組3塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)為2108個(gè)。選取所有膠上分辨清楚且組內(nèi)3炔膠中均出現(xiàn)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行兩組間差異分析，共篩選出具有明顯差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)40個(gè)，其中3倍以上差異點(diǎn)18個(gè)，有和無差異點(diǎn)3個(gè)。經(jīng)過膠內(nèi)酶切后用

5、MALDI-TOF-MS進(jìn)行檢測(cè)，得到如下結(jié)果:
　　1、在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)上調(diào)的蛋白有:Type1 inositol1，4，5-trisphosphatereceptor、Heat shock cognate protein70、Tumor protein p53、T-cell receptordetla chain、Tropomyosin2(beta) isoform1和Cyclin B3;
　　2、在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)下調(diào)的蛋白

6、有: Enolase1、M2-type pyruvate kinase和Heat shock protein27。
　　結(jié)論：
　　夏枯草提取物通過“多靶點(diǎn)、多途徑”發(fā)揮抗肺腺癌A549細(xì)胞的作用，具體機(jī)制可能是:
　　1、通過調(diào)節(jié)烯醇化酶-1、腫瘤2型丙酮酸激酶，干擾肺腺癌A549細(xì)胞內(nèi)能量代謝，降低細(xì)胞糖酵解和磷酸化能力，抑制細(xì)胞生長。
　　2、通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白B3的表達(dá)影響肺腺癌A549細(xì)胞周期，阻滯細(xì)