山梨酸納米微粒對(duì)Lux基因標(biāo)記的誘導(dǎo)型及組成型重組發(fā)光菌抑菌作用的研究.pdf

1、本研究選取誘導(dǎo)型重組菌E.coli DPD2794、E.coli TV1061及組成型重組菌E.coliTop10-P.luxCDABE、E.coli DH5α-P.luxCDABE為作用菌株，通過山梨酸納米微粒對(duì)重組發(fā)光菌生長、發(fā)光情況影響，及場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡(SEM)成像結(jié)果，對(duì)山梨酸納米微粒的抑菌活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了初步探究。試驗(yàn)得到以下結(jié)論:
　　1.誘導(dǎo)型重組菌E.coli DPD2794、E.coli TV1

2、061最適發(fā)光溫度分別為27℃、28℃，對(duì)數(shù)中后期達(dá)到最大發(fā)光強(qiáng)度255、422，最大耐受發(fā)光的溫度為33℃、32℃。E.coliDPD2794在pH6時(shí)菌體生長良好、發(fā)光強(qiáng)度最大。山梨酸納米微粒對(duì)誘導(dǎo)型重組菌E.coli DPD2794、E.coli TV1061的最小抑菌濃度(MIC)分別為60μg/mL和64μg/mL，對(duì)組成型重組菌E.coli Top10-P.luxCDABE和E.coli DH5α-P.luxCDABE的MI

3、C分別為52μg/mL和40μg/mL。
　　2.加入的山梨酸納米微粒，對(duì)兩株組成型重組菌，隨著濃度增加，最大發(fā)光強(qiáng)度顯著降低(P＜0.05);加入各菌株MIC濃度的山梨酸納米微粒，菌體生長被完全抑制，不產(chǎn)生發(fā)光。對(duì)于誘導(dǎo)型重組發(fā)光菌，E.coli DPD2794僅對(duì)有毒化合物的基因毒性產(chǎn)生響應(yīng)，高濃度山梨酸納米微粒抑制菌體發(fā)光;當(dāng)濃度≤3.75μg/mL（即1/16 MIC）對(duì)菌體發(fā)光有促進(jìn)作用。E.coli TV1061能夠?qū)?/p>

4、多種引起代謝變化的有毒化合物產(chǎn)生響應(yīng)。高濃度(≥1/4 MIC)處理菌體不發(fā)光，低濃度抑制菌體發(fā)光，山梨酸納米微粒對(duì)E.coli TV1061的發(fā)光無促進(jìn)作用。根據(jù)兩株誘導(dǎo)型重組發(fā)光菌的發(fā)光機(jī)制，推測(cè)山梨酸納米微粒是通過對(duì)菌體細(xì)胞造成DNA損傷進(jìn)行抑菌作用。
　　誘導(dǎo)型重組菌和組成型重組菌經(jīng)山梨酸納米微粒處理后的場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡(SEM)成像顯示，細(xì)胞膜被破壞，菌體破裂，胞內(nèi)物質(zhì)溶出，部分破損菌體有山梨酸納米微粒附著。根據(jù)SEM成像