金盞菊提取物化學(xué)轉(zhuǎn)化和生物轉(zhuǎn)化法制備葉黃素的研究.pdf

1、本論文以水解金盞菊提取物中葉黃素酯從而得到游離態(tài)葉黃素為研究對(duì)象，主要包括以下六個(gè)方面。 (1)國(guó)內(nèi)外關(guān)于葉黃素方面的研究進(jìn)展。 查閱國(guó)內(nèi)外近二十年來(lái)關(guān)于葉黃素和葉黃素酯的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)其分析、提取、分離、轉(zhuǎn)化工作進(jìn)行了歸納和總結(jié)。 (2)建立了同時(shí)測(cè)定葉黃素和葉黃素酯的HPLC法。 建立了一種高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金盞菊中葉黃素和葉黃素含量的方法。采用KNAUER Eurospher-100 C18(

2、3.9×300rion，4.6μm)色譜柱，以乙腈-甲醇-乙酸乙酯混合液為流動(dòng)相(v／v／V 55:1:44)，流速1.0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)460nm；柱溫：25℃。 (3)建了化學(xué)法轉(zhuǎn)化葉黃素酯為游離態(tài)葉黃素的工藝。 考察了皂化工藝中溶劑類型、KOH濃度、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度和反應(yīng)底物比例對(duì)皂化結(jié)果的影響，最佳皂化工藝為：將10.0克葉黃素酯加入50mL飽和KOH甲醇溶液，在室溫下(25℃)下反應(yīng)4h。

3、(4)建立了葉黃素分離純化工藝 葉黃素最佳純化工藝為：將皂化液的濾渣水洗的最佳條件為5℃，冷水洗滌至流出液呈中性，過(guò)濾，干燥即可獲得純度大于22.0％的葉黃素產(chǎn)品；將水洗后濾渣，用40mL5℃正已烷分兩次洗滌，再在常溫下溶于二氯甲烷中制得飽和溶液，向飽和溶液中滴加正己烷至出現(xiàn)渾濁，放入冰箱于5℃靜置過(guò)夜，再滴加二氯甲烷0.4倍正己烷靜置過(guò)夜，過(guò)濾后即得到純度大于90.0％的葉黃素產(chǎn)品。 (5)葉黃素酯生物轉(zhuǎn)化法的

4、菌種篩選。 用平板誘導(dǎo)培養(yǎng)基考察了糙皮側(cè)耳、黑曲酶、青霉對(duì)葉黃素酯的降解作用，發(fā)現(xiàn)接種青霉和黑曲酶孢子均能將培養(yǎng)基中葉黃素酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)葉黃素，青霉的轉(zhuǎn)化效果優(yōu)于黑曲霉；糙皮側(cè)耳孢子在培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，但接種菌種后亦能將培養(yǎng)基中葉黃素酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)葉黃素。 (6)青霉搖瓶發(fā)酵法轉(zhuǎn)化初步研究 用青霉搖瓶發(fā)酵轉(zhuǎn)化葉黃素酯法制備葉黃素，考察了pH值、接種量和發(fā)酵時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效果的影響。結(jié)果表明在酸條件有利于轉(zhuǎn)化的進(jìn)行；