植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化法制備共軛亞油酸的研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是亞油酸(Linoleic Acid，LA)衍生的共軛雙烯酸的多種位置與幾何異構(gòu)體的總稱。它具有很多營養(yǎng)和保健功能，如抗癌、抗動脈粥樣硬化和延緩機體免疫力衰退、減肥等。在共軛亞油酸的各種立體異構(gòu)體中c9，t11-18：2被認為最具生物活性。乳酸菌生物轉(zhuǎn)化共軛亞油酸是當前生物法轉(zhuǎn)化共軛亞油酸研究的熱點，為共軛亞油酸的合成提供了另一種有效的途徑。 本文主要通過比較

2、不同反應體系中植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化CLA的轉(zhuǎn)化率，確定最適合的反應體系為靜息態(tài)細胞在磷酸鹽緩沖溶液中生物轉(zhuǎn)化CLA。通過正交實驗確定了最適合的反應條件為：底物濃度為3mg/mL，細胞濃度為4×10<'10>cfu/mL，反應溫度：37℃，pH6.0，轉(zhuǎn)化時間24h。在此反應條件下，CLA轉(zhuǎn)化率為31.76％。通過GC法和GC-MS法檢測，發(fā)現(xiàn)反應過程中主要產(chǎn)生兩個產(chǎn)物：CLA和羥基脂肪酸HY。產(chǎn)物CLA中c9，t11-CLA占

3、96.60％，t10，c12-CLA占2.40％，還有少量其他異構(gòu)體，說明亞油酸異構(gòu)酶有高度的專一性。 根據(jù)植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化CLA的反應進程曲線以及轉(zhuǎn)化機理探索實驗可知，c9，t11-CLA是生物轉(zhuǎn)化過程的反應中間體，其可能的反應機理是：第一步，LA在亞油酸異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)化為CLA：第二步，c9，t11-CLA在水合酶的作用下進一步轉(zhuǎn)化為羥基脂肪酸HY。 本文采用超聲波破碎細胞獲取亞油酸異構(gòu)酶粗酶，最佳

4、的破碎條件為：破碎功率320W，破碎工作時間為7.5min，菌懸液濃度11.25g/50mL，提取pH7.0，添加0.2mol/LNaCl溶液。并研究了亞油酸異構(gòu)酶酶反應的最適條件為：pH7.5，溫度37℃，LA濃度0.8mg/mL，酶液體積3mL以磷酸鈉一檸檬酸緩沖溶液為反應介質(zhì)，Ca<'2+>，螯合劑1，10-菲噦啉和EGTA對LI粗酶沒有明顯的影響。酶液在4℃，pH7.5的磷酸鈉一檸檬酸緩沖溶液中有較好的穩(wěn)定性，酶液中添加20％甘