泰山松花粉及蘆薈多糖與蜂膠的合劑對(duì)免疫雞的免疫增強(qiáng)作用.pdf

1、細(xì)菌、病毒病原體引起的動(dòng)物傳染病發(fā)展趨勢越來越復(fù)雜、嚴(yán)峻，在控制疾病方面抗生素發(fā)揮著著越來越重要的作用，但是它們的頻繁使用會(huì)導(dǎo)致藥物殘留以及耐藥菌株的出現(xiàn)。目前，預(yù)防接種疫苗是減少傳染病發(fā)病率的最佳途徑，一般來說，將免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用在疫苗上，不僅可以增強(qiáng)疫苗的免疫反應(yīng)，而且能延長免疫增強(qiáng)作用時(shí)間。鑒于本實(shí)驗(yàn)室前期的相關(guān)研究，來自不同資源的泰山松花粉多糖、蘆薈多糖和蜂膠被證明有良好的免疫調(diào)節(jié)功能和類似的免疫增強(qiáng)效果，但是我們尚不清楚當(dāng)它們聯(lián)

2、合使用時(shí)，是否會(huì)具有協(xié)同的免疫增強(qiáng)效果？本試驗(yàn)利用泰山松花粉多糖、蜂膠和蘆薈多糖這三種免疫調(diào)節(jié)劑，以它們單獨(dú)或混合地應(yīng)用在免疫禽波氏桿菌滅活苗、新城疫弱毒疫苗的雛雞上作為研究切入點(diǎn)，通過測定體液免疫和細(xì)胞免疫相關(guān)免疫指標(biāo)，探討泰山松花粉及蘆薈多糖與蜂膠的合劑對(duì)免疫雞的免疫增強(qiáng)效果，篩選出最佳組方，旨在為畜禽業(yè)新一代疫苗佐劑或免疫增強(qiáng)劑的研制開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　本研究分為三方面內(nèi)容:
　　1.植物多糖的提取及測定
　

3、　泰山松花粉多糖和蘆薈多糖由本實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)后的水提醇沉法提取，由苯酚-硫酸法測定多糖含量。該方法泰山松花粉多糖、蘆薈多糖的得率分別為4.93％、2.67％，多糖含量為76.4％、80.4％。
　　2.不同免疫佐劑組方對(duì)禽波氏桿菌滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用的研究
　　為研究泰山松花粉及蘆薈多糖與蜂膠的合劑對(duì)禽波氏桿菌滅活疫苗的免疫增強(qiáng)效果。將160只3日齡SPF雛雞隨機(jī)分為8組，在3、7和12日齡，TPPPS、PP和AP組雛雞分別皮

4、下注射含有泰山松花粉多糖、蜂膠和蘆薈多糖單一免疫佐劑的禽波氏桿菌滅活疫苗;TPPPS-PP、PP-AP、TPPPS-AP組雛雞分別皮下注射內(nèi)含泰山松花粉多糖和蜂膠合劑、蜂膠和蘆薈多糖合劑、泰山松花粉多糖和蘆薈多糖合劑的禽波氏桿菌滅活疫苗;PBS組雛雞皮下注射等量PBS的禽波氏桿菌滅活疫苗;Mock組雛雞僅皮下注射等量生理鹽水。在免疫后7、14、21、28、35和42天，每組隨機(jī)取3份血樣，依次測定血清抗體效價(jià)、血液IL-2含量、外周血淋

5、巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果顯示，在14、21、28和35d時(shí)TPPPS、PP、TPPPS-PP組各免疫指標(biāo)高于其他各組，且顯著高于PBS、Mock組(P＜0.05)，在14、21和28d時(shí)TPPPS-PP組各指標(biāo)具有最高水平(P＜0.05)。結(jié)果表明，泰山松花粉多糖和蜂膠合劑能誘導(dǎo)禽波氏桿菌滅活疫苗產(chǎn)生最高水平的體液免疫和細(xì)胞免疫。因此，泰山松花粉多糖和蜂膠可協(xié)同增強(qiáng)禽波氏桿菌滅活疫苗的免疫效應(yīng)。

6、　　3.不同免疫增強(qiáng)劑組合對(duì)新城疫弱毒疫苗的免疫增強(qiáng)作用的研究
　　為研究泰山松花粉及蘆薈多糖與蜂膠的合劑對(duì)新城疫弱毒疫苗的免疫增強(qiáng)效果。將160只1日齡SPF雛雞隨機(jī)分為8組，其中7組疫苗組在12日齡用新城疫Ⅳ系疫苗點(diǎn)眼滴鼻首免，且在28日齡肌肉注射二免，在首免的同時(shí)，TPPPS、PP、AP組雛雞分別皮下注射泰山松花粉多糖、蜂膠和蘆薈多糖;TPPPS-PP、PP-AP、TPPPS-AP組雛雞分別皮下注射泰山松花粉多糖和蜂膠合劑、

7、蜂膠和蘆薈多糖合劑、泰山松花粉多糖和蘆薈多糖合劑;PBS組雛雞皮下注射等量PBS。MOCK組雛雞僅皮下注射等量生理鹽水。在免疫后7、14、21、28、35和42天，每組隨機(jī)取三份血樣，依次測定血清抗體效價(jià)、血液IFN-γ含量、外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果顯示，在除7d外的所有時(shí)間點(diǎn)時(shí)7個(gè)疫苗組血清抗體水平、IFN-γ含量、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量均高于MOCK組;在1