電化學(xué)傳感檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻“汕優(yōu)63”技術(shù)研究.pdf

1、由于近幾年出口大米轉(zhuǎn)基因污染事件的發(fā)生，急需開(kāi)發(fā)針對(duì)轉(zhuǎn)基因“汕優(yōu)63”大米簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、可靠的定量檢測(cè)方法。新興的電化學(xué)DNA生物傳感技術(shù)在最近幾年發(fā)展迅速。它致力于建立簡(jiǎn)單、快速、易于自動(dòng)化、便攜且成本低的檢測(cè)系統(tǒng)，在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)上具有很大發(fā)展?jié)摿?。轉(zhuǎn)入的基因序列可以通過(guò)固定于傳感元件表面的特異性捕獲探針進(jìn)行檢測(cè)。
　　因此，本論文建立了一套運(yùn)用電化學(xué)傳感技術(shù)檢測(cè)Bt63特異性序列的體系。基于亞甲基藍(lán)的方波伏安響應(yīng)被用于監(jiān)測(cè)探

2、針修飾及目標(biāo)序列的雜交過(guò)程。實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化了亞甲基藍(lán)的孵育及雜交過(guò)程中影響電化學(xué)檢測(cè)結(jié)果的因素。結(jié)果表明，亞甲基藍(lán)的電化學(xué)還原峰值與DNA濃度的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，線性范圍為1.0×10-10～1.0×10-5 M，檢測(cè)限為5.8×10-11M。
　　本實(shí)驗(yàn)也用電化學(xué)傳感技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻葉片粉末及幾種不同的大米樣品進(jìn)行了檢測(cè)，驗(yàn)證其在實(shí)際檢測(cè)中的應(yīng)用性及是否可有效區(qū)分不同陽(yáng)性比例的DNA。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，電化學(xué)傳感可有效應(yīng)用于作物和不同陽(yáng)

3、性摻比的樣品檢測(cè)，并且與PCR方法相比，檢測(cè)范圍更寬，靈敏度更高，因此具有很高的市場(chǎng)發(fā)展及應(yīng)用前景。
　　為提高傳感器的檢測(cè)靈敏度，本實(shí)驗(yàn)也開(kāi)發(fā)了一種利用簡(jiǎn)便有效的原位超聲方法制備石墨烯和納米金的復(fù)合物作為修飾材料的Bt63大米電化學(xué)傳感檢測(cè)平臺(tái)。通過(guò)紫外、透射電鏡、拉曼和循環(huán)伏安法表征可以看出氧化石墨烯被成功還原，平均粒徑為30 nm的納米金粒子均勻分布于還原氧化石墨烯表面。對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化后，亞甲基藍(lán)的還原峰與DNA濃度的對(duì)