大豆堿性多肽對大腸桿菌的抑菌機制及應用研究.pdf

1、食品營養(yǎng)豐富，極易受到微生物的污染，導致腐敗變質(zhì)。通常情況下，人們采用添加防腐劑的方法來防止食品腐敗，但隨著生活水平的提高和消費者對健康的追求，加之化學防腐劑多少都有一定的毒害作用，所以人們已開始轉(zhuǎn)向天然防腐劑的開發(fā)。從大豆中純化的堿性多肽成為天然防腐抗菌劑開發(fā)的研究熱點之一。
　　本課題探究了純化的堿性多肽對大腸桿菌的抗菌效果，并研究了堿性多肽對細胞膜的作用及其細胞膜成分的相互反應。此外，還進一步將堿性多肽應用到食品防腐中，探究

2、了堿性多肽對牛乳感官特性及理化指標的影響，實驗結(jié)果如下：
　　(1)通過菌落計數(shù)及牛津杯的實驗方法發(fā)現(xiàn)，GBP對大腸桿菌有明顯的抑制作用,且GBP的抑菌效果和濃度呈現(xiàn)正相關，當GBP濃度為200μg/ml時，抑菌效果最好。原子力顯微鏡觀察到GBP能明顯破壞大腸桿菌的細胞形態(tài)，使細胞表面出現(xiàn)明顯的不規(guī)則褶皺和凹槽，隨著時間的延長，GBP對大腸桿菌的破壞性逐漸增大，8小時后細胞結(jié)構(gòu)完全塌陷。
　　(2)在探究GBP對大腸桿菌細胞

3、膜的作用機制時，主要研究了大腸桿菌細胞的表面疏水性，堿性磷酸酶的泄露以及細胞外膜、內(nèi)膜的通透性。當200μg/ml GBP處理大腸桿菌時，能夠暴露細胞表面疏水端，增大大腸桿菌的細胞表面疏水性；隨著時間的增加，位于細胞周質(zhì)空間的堿性磷酸酶泄露量也逐漸增加，說明GBP對大腸桿菌的細胞膜有明顯的破壞作用；GBP處理大腸桿菌后，GBP能破壞大腸桿菌外膜，增加外膜通透性，進而增加GBP對利福平、紅霉素的敏感性；能明顯增加大腸桿菌內(nèi)膜的通透性，從而

4、使鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷立即進入細胞，與細胞內(nèi)的β-半乳糖苷酶反應生成黃色的鄰-硝基苯酚，且GBP濃度越高，大腸桿菌內(nèi)膜通透性越大。
　　(3)在研究GBP對大腸桿菌細胞膜成分的作用機制時，通過GBP的抑菌濃度動力學實驗發(fā)現(xiàn)，對于GBP的處理，大腸桿菌原生質(zhì)體比菌體更敏感，GBP對大腸桿菌原生質(zhì)體的最小抑菌濃度為25μg/ml，明顯低于大腸桿菌的最小抑菌濃度（200μg/ml）。還原糖的泄露發(fā)現(xiàn)隨著時間和GBP濃度的增加，還

5、原糖泄露量明顯增加。200μg/ml GBP處理大腸桿菌后，GBP能夠引起大腸桿菌外膜脂多糖的泄露，并將大分子分解成小分子；能破壞細胞膜，在Triton X-114存在的條件下促進膜蛋白的提取，而且濃度越高，對細胞膜的破壞性越大；能暴露有熒光性的Phe殘基，進而增加細胞膜蛋白的熒光性，但200μg/ml的GBP足以將Phe殘基全部暴露出來。
　　(4)在對牛乳的保鮮效果研究中，與對照組相比，經(jīng)不同濃度的GBP處理后，對牛乳的感官特