高速逆流色譜法分離制備蜂毒肽.pdf

1、高速逆流色譜(high-speedcounter-currentchromatography，簡稱HSCCC)是一種新型的利用液-液分配原理進行分離的一種色譜技術。其不使用固體作為載體，避免了固相載體的不可逆吸附和峰形拖尾等不利現(xiàn)象。可以粗品直接進樣，可以實現(xiàn)分離純化與制備同步完成。目前高速逆流色譜已廣泛的運用于天然產(chǎn)物、海洋活性成分、無機物、抗生素等物質(zhì)的分離純化中。
　　蜂毒是工蜂用其螯針刺敵時分泌的一種毒汁，其成分十分復雜，

2、主要為肽類、酶類及非肽類物質(zhì)。其中蜂毒肽是蜂毒主要組成成分及活性成分，是一種含有26個氨基酸殘基的陽離子抗菌肽。其能抗炎、鎮(zhèn)痛、抑制血小板凝集。但由于蜂毒中成分復雜且多呈堿性，因此從粗蜂毒中純化蜂毒肽比較困難。目前國內(nèi)外多采用多步層析的方法制備純化蜂毒肽，其過程繁瑣，成本高，所得制品需要樣品前處理及后續(xù)處理。
　　本文采用高速逆流色譜方法，建立一種新的分離蜂毒肽方法，鑒定了所得產(chǎn)物的分子量及氨基酸一級結構，證明分離所得物質(zhì)為蜂毒肽

3、。此方法降低了成本，樣品無需前處理，所得產(chǎn)物不需后續(xù)處理，增加了一次分離量。
　　根據(jù)蜂毒肽的極性及理化性質(zhì)，參考國內(nèi)外溶劑體系比例組成，選擇了多種溶劑體系進行初步選擇，最后總結了五種可參考數(shù)據(jù)的溶劑體系：正己烷/甲醇/水、正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水、苯/乙酸乙酯/甲醇/水、氯仿/甲醇/水，氯仿/甲醇/水(醋酸)。比對了這五種體系的不同比例組合的K值和分層時間后，選擇了正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水體系的1/1/1/1(v/v)、1/

4、6/1.5/7.5(v/v)及3/7/5/5(v/v)三種比例組份體系；苯/乙酸乙酯/甲醇/水的1/1/1/1(v/v)體系；氯仿/甲醇/水的1/1/1/1(v/v/v)及4/3/2(v/v/v)體系；以及氯仿/甲醇/水(醋酸0.2mol/L)的1/1/1(v/v/v)及4/3/2(v/v/v)體系。考察這些體系的固定相保留率、HSCCC平衡時間及是否出峰，保留了正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水的3/7/5/5(v/v)體系。對此體系進行分離