發(fā)菜糖蛋白的分離純化及功能活性研究.pdf

1、發(fā)菜（Nostoc flagelliforme），主要分布于我國(guó)寧夏、內(nèi)蒙古及甘肅地區(qū)（干旱和半干旱地帶）的陸生性固氮念珠藻藍(lán)細(xì)菌（藍(lán)藻），具有重要的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值。近年來(lái)，關(guān)于發(fā)菜的分布，生理生長(zhǎng)、人工培養(yǎng)以及發(fā)菜胞外多糖都有了一定的研究，而關(guān)于發(fā)菜糖蛋白研究較少。糖蛋白是植物體內(nèi)一種高效的生物活性物質(zhì)，糖蛋白具有抗氧化、增強(qiáng)免疫和抑制腫瘤等功能，所以從營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富的發(fā)菜細(xì)胞中提取出糖蛋白，并進(jìn)一步研究它的性質(zhì)，以及探索它的功能活性有

2、重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。
　　本課題利用響應(yīng)面法對(duì)熱水抽提法提取發(fā)菜細(xì)胞糖蛋白，通過DEAE-52陰離子交換層析和葡聚糖凝膠層析結(jié)合分離純化，研究確定糖蛋白的一些特性，并對(duì)其糖蛋白抗氧化活性及免疫活性進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下：
　　1、利用響應(yīng)面法對(duì)熱水抽提法提取發(fā)菜細(xì)胞糖蛋白，以培養(yǎng)的發(fā)菜細(xì)胞為原料，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取提取溫度、提取時(shí)間和料液比為自變量，糖蛋白的得率為響應(yīng)值，根據(jù)響應(yīng)面Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原

3、理，得到回歸方程的預(yù)測(cè)模型，所得方程擬合性好。得出最優(yōu)提取條件為：提取溫度95℃，時(shí)間4h，料液比為1:15，在此條件下糖蛋白最大得率為0.173％。
　　2、通過DEAE-52陰離子交換層析和葡聚糖凝膠層析結(jié)合分離純化，得到一種純化發(fā)菜糖蛋白（Nostoc flagelliforme Glycoprotein，NGP-1）組分，其分子量為40.0KDa。采用苯酚硫酸法測(cè)定NGP-1的總糖含量為76.25%，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含

4、量為15.62%。離子色譜儀檢測(cè)單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。由氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)得，發(fā)菜糖蛋白NGP-1經(jīng)酸水解后，共檢測(cè)到17種氨基酸，氨基酸含量總和為13.42%。
　　3、β-消除反應(yīng)說明發(fā)菜糖蛋白NGP-1含有的糖肽鍵類型為O-連接，經(jīng)紅外光譜分析，發(fā)菜糖蛋白NGP-1的糖苷類型為吡喃型，DSC測(cè)定NGP-1的熱變性溫度在140℃左右。
　　4、NGP

5、-1有一定的抗氧化活性，當(dāng)發(fā)菜糖蛋白在4mg/mL的時(shí)候，其還原力、DPPH自由基清除率和羥基自由基清除率都達(dá)到最大，而當(dāng)發(fā)菜糖蛋白濃度在180μg/mL的時(shí)候，超氧陰離子自由基清除率達(dá)到最大。
　　5、NGP-1灌胃小鼠并測(cè)定免疫器官脾臟和胸腺指數(shù)，研究發(fā)現(xiàn)低中劑量的發(fā)菜糖蛋白對(duì)于免疫器官指數(shù)有非常顯著提高，對(duì)于實(shí)驗(yàn)中血清溶血素含量的測(cè)定，研究發(fā)現(xiàn)5mg/kg和10mg/kg的影響最明顯，并且隨著劑量的增加呈現(xiàn)一定的效應(yīng)關(guān)系。脾