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文檔簡介
1、蜂毒活性肽是蜂毒中的主要物質,具有抗炎、抗癌、抗輻射等功能。蜂膠含有豐富的黃酮類物質,具有抗菌、抗氧化、抗癌等多種功效。本文以蜂毒和蜂膠為原料,研究了蜂毒活性肽的分離純化,以及蜂膠黃酮類物質的提取工藝,以抗氧化、抗痛風、抗風濕性關節(jié)炎生理活性為指標,經復配獲得蜂毒蜂膠復配產品。主要研究結果如下:
1.以蜜蜂蜂毒為實驗材料,經Sephadex凝膠、醇沉、反相高效液相色譜(RT-HPLC)優(yōu)化分離純化條件。通過SephadexG-
2、25凝膠,以流速28 mL/h、上樣量1.0 mL、上樣濃度1.0 mg/mL,獲得兩個組分P1、P2。收集P1組分進行冷凍干燥,用3倍體積無水乙醇沉淀,3000 r/min離心5 min,沉淀即為蜂毒肽,測得蜂毒肽的相對分子量為2840 Da左右,提取率為96%,純度為98%;上清經RT-HPLC,色譜柱Zorbax SB-C18(4.6×250μm)、進樣量10μL、乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液為流動相,得到三種組分Q1、Q2、Q3
3、,分別為肥大細胞脫粒肽(MCD肽)、蜂毒明肽、鎮(zhèn)靜肽,相對分子量2592 Da、2035 Da、2700 Da左右,提取率分別為78.6%、89%、70%,其中MCD肽和蜂毒明肽純度分別為91.28%、90.16%。
2.以蜜蜂蜂膠為實驗材料,經單因素與響應面研究,優(yōu)化蜂膠黃酮類物質的提取條件為:乙醇濃度82%,提取時間3h,提取溫度83℃,料液比1∶10,在此條件下蜂膠黃酮類物質的得率為46.30%。
3.蜂毒活性
4、肽各組分抗氧化、抗痛風、抗風濕性關節(jié)炎生理活性研究。
經體外抗氧化實驗,0.20 mg/mL蜂毒肽對羥基自由基清除率為15.32%,對超氧化物陰離子的清除率為16.04%;相同濃度的蜂毒明肽、MCD肽對羥基自由基清除率分別為3.56%、1.14%,對超氧化物陰離子的清除率分別為4.51%、1.34%。說明蜂毒肽是蜂毒中主要抗氧化物質。
經小鼠痛風實驗,蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高劑量組與模型組相比XOD活性降低了46
5、.94%、42.00%、31.54%,UA含量降低了62.01%、57.38%、59.75%;與空白組相比CRE含量高了14.63%、19.34%、20.47%,BUN含量高了12.79%、19.16%、17.17%。說明蜂毒活性肽中抗痛風的主要物質為蜂毒肽。
經小鼠風濕性關節(jié)炎實驗,蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高劑量組與模型組相比TNF-α含量降低28.32%、24.68%、23.29%,IL-6含量降低54.52%、51.9
6、7%、50.99%,IL-1β含量降低26.60%、20.81%、18.94%。表明蜂毒活性肽中抗風濕性關節(jié)炎的主要物質為蜂毒肽。
4.蜂膠黃酮類物質抗氧化、抗痛風、抗風濕性關節(jié)炎生理活性研究。
經體外抗氧化實驗,0.83 mg/mL的蜂膠黃酮類物質對羥基自由基的清除率為96.39%,對超氧化物陰離子的清除率為91.89%,說明蜂膠黃酮類物質具有抗氧化的功效。
經小鼠痛風實驗,蜂膠黃酮類物質高劑量組XOD活
7、性比模型組降低45.58%,UA含量降低34.38%;與空白組相比CRE含量升高7.69%,BUN含量升高17.91%??梢姺淠z黃酮類物質具有對抗痛風的作用。
經小鼠風濕性關節(jié)炎實驗,蜂膠黃酮類物質高劑量組TNF-α含量比模型組降低28.08%,IL-6含量降低49.44%,IL-1β含量降低18.45%。表明蜂膠黃酮類物質具有對抗風濕性關節(jié)炎的功效。
5.蜂毒蜂膠抗氧化、抗痛風、抗風濕性關節(jié)炎生理活性復配條件研究。
8、
經體外抗氧化實驗,0.2 mg/mL的蜂毒肽與0.83 mg/mL的蜂膠黃酮類物質按照1∶5配制,對·OH的清除率為96.40%,對超氧化物陰離子自由基清除率為91.90%。
經小鼠痛風實驗,0.05 mg/mL蜂毒肽與0.326 mg/mL蜂膠黃酮類物質按照1∶8的比例進行調配。與模型組相比,1∶8組XOD活性降低56.75%,UA含量降低46.81%;與空白組相比,CRE、BUN含量分別上升8.66%、25.7
9、8%。說明復配產品具有緩解痛風的效果,且不造成腎功能的損傷。
經小鼠風濕性關節(jié)炎實驗,0.05 mg/mL蜂毒肽與0.326 mg/mL蜂膠黃酮類物質按照1∶7的比例進行調配。與模型組相比,1∶7組血清TNF-α、 IL-6、IL-1β含量分別降低33.28%、50.60%、15.81%。說明復配產品具有緩解風濕性關節(jié)炎的效果。
目前,痛風、風濕性關節(jié)炎等慢性疾病的患病幾率呈現(xiàn)逐年上升趨勢,研究緩解痛風、風濕性關節(jié)炎
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