蜂毒活性肽的分離純化及生理功能研究.pdf

1、蜂毒活性肽是蜂毒中的主要物質(zhì)，具有抗炎、抗癌、抗輻射等功能。蜂膠含有豐富的黃酮類物質(zhì)，具有抗菌、抗氧化、抗癌等多種功效。本文以蜂毒和蜂膠為原料，研究了蜂毒活性肽的分離純化，以及蜂膠黃酮類物質(zhì)的提取工藝，以抗氧化、抗痛風(fēng)、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎生理活性為指標(biāo)，經(jīng)復(fù)配獲得蜂毒蜂膠復(fù)配產(chǎn)品。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以蜜蜂蜂毒為實驗材料，經(jīng)Sephadex凝膠、醇沉、反相高效液相色譜(RT-HPLC)優(yōu)化分離純化條件。通過SephadexG-

2、25凝膠，以流速28 mL/h、上樣量1.0 mL、上樣濃度1.0 mg/mL，獲得兩個組分P1、P2。收集P1組分進行冷凍干燥，用3倍體積無水乙醇沉淀，3000 r/min離心5 min，沉淀即為蜂毒肽，測得蜂毒肽的相對分子量為2840 Da左右，提取率為96％，純度為98％;上清經(jīng)RT-HPLC，色譜柱Zorbax SB-C18(4.6×250μm)、進樣量10μL、乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液為流動相，得到三種組分Q1、Q2、Q3

3、，分別為肥大細胞脫粒肽（MCD肽）、蜂毒明肽、鎮(zhèn)靜肽，相對分子量2592 Da、2035 Da、2700 Da左右，提取率分別為78.6％、89％、70％，其中MCD肽和蜂毒明肽純度分別為91.28％、90.16％。
　　2.以蜜蜂蜂膠為實驗材料，經(jīng)單因素與響應(yīng)面研究，優(yōu)化蜂膠黃酮類物質(zhì)的提取條件為:乙醇濃度82％，提取時間3h，提取溫度83℃，料液比1∶10，在此條件下蜂膠黃酮類物質(zhì)的得率為46.30％。
　　3.蜂毒活性

4、肽各組分抗氧化、抗痛風(fēng)、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎生理活性研究。
　　經(jīng)體外抗氧化實驗，0.20 mg/mL蜂毒肽對羥基自由基清除率為15.32％，對超氧化物陰離子的清除率為16.04％;相同濃度的蜂毒明肽、MCD肽對羥基自由基清除率分別為3.56％、1.14％，對超氧化物陰離子的清除率分別為4.51％、1.34％。說明蜂毒肽是蜂毒中主要抗氧化物質(zhì)。
　　經(jīng)小鼠痛風(fēng)實驗，蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高劑量組與模型組相比XOD活性降低了46

5、.94％、42.00％、31.54％，UA含量降低了62.01％、57.38％、59.75％;與空白組相比CRE含量高了14.63％、19.34％、20.47％，BUN含量高了12.79％、19.16％、17.17％。說明蜂毒活性肽中抗痛風(fēng)的主要物質(zhì)為蜂毒肽。
　　經(jīng)小鼠風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實驗，蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高劑量組與模型組相比TNF-α含量降低28.32％、24.68％、23.29％，IL-6含量降低54.52％、51.9

6、7％、50.99％，IL-1β含量降低26.60％、20.81％、18.94％。表明蜂毒活性肽中抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的主要物質(zhì)為蜂毒肽。
　　4.蜂膠黃酮類物質(zhì)抗氧化、抗痛風(fēng)、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎生理活性研究。
　　經(jīng)體外抗氧化實驗，0.83 mg/mL的蜂膠黃酮類物質(zhì)對羥基自由基的清除率為96.39％，對超氧化物陰離子的清除率為91.89％，說明蜂膠黃酮類物質(zhì)具有抗氧化的功效。
　　經(jīng)小鼠痛風(fēng)實驗，蜂膠黃酮類物質(zhì)高劑量組XOD活

7、性比模型組降低45.58％，UA含量降低34.38％;與空白組相比CRE含量升高7.69％，BUN含量升高17.91％?？梢姺淠z黃酮類物質(zhì)具有對抗痛風(fēng)的作用。
　　經(jīng)小鼠風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實驗，蜂膠黃酮類物質(zhì)高劑量組TNF-α含量比模型組降低28.08％，IL-6含量降低49.44％，IL-1β含量降低18.45％。表明蜂膠黃酮類物質(zhì)具有對抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的功效。
　　5.蜂毒蜂膠抗氧化、抗痛風(fēng)、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎生理活性復(fù)配條件研究。

8、
　　經(jīng)體外抗氧化實驗，0.2 mg/mL的蜂毒肽與0.83 mg/mL的蜂膠黃酮類物質(zhì)按照1∶5配制，對·OH的清除率為96.40％，對超氧化物陰離子自由基清除率為91.90％。
　　經(jīng)小鼠痛風(fēng)實驗，0.05 mg/mL蜂毒肽與0.326 mg/mL蜂膠黃酮類物質(zhì)按照1∶8的比例進行調(diào)配。與模型組相比，1∶8組XOD活性降低56.75％，UA含量降低46.81％;與空白組相比，CRE、BUN含量分別上升8.66％、25.7

9、8％。說明復(fù)配產(chǎn)品具有緩解痛風(fēng)的效果，且不造成腎功能的損傷。
　　經(jīng)小鼠風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實驗，0.05 mg/mL蜂毒肽與0.326 mg/mL蜂膠黃酮類物質(zhì)按照1∶7的比例進行調(diào)配。與模型組相比，1∶7組血清TNF-α、 IL-6、IL-1β含量分別降低33.28％、50.60％、15.81％。說明復(fù)配產(chǎn)品具有緩解風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。
　　目前，痛風(fēng)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等慢性疾病的患病幾率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，研究緩解痛風(fēng)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎