新型逆流色譜技術(shù)及其在天然生物活性成分研究中的應(yīng)用.pdf

1、逆流色譜(CCC)是一種不用固相支持體的液-液分配色譜技術(shù)。它具有分離量大、回收率高、分離環(huán)境緩和、節(jié)省溶劑等優(yōu)點，已在天然來源有效成分的分離純化中顯示出獨特的優(yōu)勢。本論文以復(fù)雜天然產(chǎn)物粗提物為研究對象，針對現(xiàn)有方法和技術(shù)的不足，發(fā)展并建立了幾種新型逆流色譜技術(shù)，并成功應(yīng)用于天然來源生物活性成分的快速分離分析，具體研究內(nèi)容包括以下幾個部分：
　　 第一部分應(yīng)用立式逆流色譜(UCCC)，建立了從傳統(tǒng)藥用植物姜、冬凌草和厚樸中制備性

2、分離其主要有效成分的逆流色譜方法。利用該方法，從600毫克姜提取物中一步制備分離了150毫克(E)-4-(3'，4'-dimethoxyphenyl)but-3-enylacetate和175毫克(E)-4-(3'，4'-dimethoxyphenyl)but-1,3-diene，純度分別為98.7％和95.1％；從200毫克冬凌草甲素粗品中分離制備了純度達(dá)97.8％的冬凌草甲素120毫克。此外，還成功的從2克厚樸提取物中制備分離了位置

3、異構(gòu)體厚樸酚與和厚樸酚，并與半制備型高效液相色譜進(jìn)行了對比研究。
　　 第二部分發(fā)展了一種“中心切割”式逆流色譜聯(lián)用系統(tǒng)。它采用上述立式逆流色譜儀(UCCC,VC=1600mL)作為第一維，一臺半制備型Ito-Ⅳ逆流色譜儀(HSCCC,VC=140mL)作為第二維，并通過自行設(shè)計的閥切換系統(tǒng)進(jìn)行在線連接。應(yīng)用該“中心切割”式逆流色譜聯(lián)用系統(tǒng)，成功地從印尼藥用植物Artocorpus altilis提取物中一步分離制備了三種主要黃

4、酮類成分。此外，通過改變聯(lián)用方式，即以HSCCC作為第一維，以UCCC作為第二維，有效的解決了逆流色譜聯(lián)用系統(tǒng)中的大體積進(jìn)樣問題。采用兩種不同比例的兩相溶劑體系及連續(xù)進(jìn)樣方式，一次性分離制備了冬凌草乙醇提取物中的冬凌草甲素和冬凌草乙素。結(jié)果表明，該聯(lián)用系統(tǒng)可以有效提高逆流色譜的分辨能力和峰容量，提高分離效率。
　　 第三部分發(fā)展并建立了反推逆流色譜方法及其理論。該方法充分利用了液體固定相的特點，在不改變流動相的條件下切換流向，使

5、柱中不相溶兩相體系的流體動力學(xué)平衡迅速瓦解，而具有高保留值的分析物則隨著色譜固定相被“推出”色譜柱。利用一組標(biāo)準(zhǔn)混合物對反推逆流色譜方法及理論進(jìn)行了系統(tǒng)研究和驗證。此外，還成功應(yīng)用該方法對兩種天然產(chǎn)物粗提物蓽茇和吳茱萸中的化學(xué)成分進(jìn)行了快速分離分析，并與先前建立的洗脫-推出方法做了對比研究。結(jié)果顯示反推逆流色譜方法充分拓展了逆流色譜的極性適用區(qū)間，非常適合天然產(chǎn)物提取物等復(fù)雜樣品的快速制備性分離。
　　 第四部分設(shè)計并研制了一臺

6、分析型三柱并聯(lián)逆流色譜儀，并結(jié)合Arizona溶劑系統(tǒng)與洗脫-推出方法，建立了一種高通量的兩相溶劑體系篩選方案。對于一給定復(fù)雜樣品只需花半天時間使用少于一升的溶劑就可以確定其最佳的兩相溶劑體系組成。該方法成功應(yīng)用于兩種天然產(chǎn)物粗提物蓽茇和虎杖中活性成分的快速篩選。結(jié)合抗氧化活性檢測以及液質(zhì)聯(lián)用分析，快速確定了虎杖提取物中的潛在抗氧化活性成分。結(jié)果顯示該高通量逆流色譜方法非常適合復(fù)雜天然產(chǎn)物的快速分離分析，在新型天然藥物先導(dǎo)化合物的篩選中