氨基酸類陽離子脂質(zhì)體的合成及其基因轉(zhuǎn)染效率評價.pdf

1、基因治療在腫瘤治療和遺傳病治療方面有很好的前景,引起了廣泛關(guān)注?；蛑委熋媾R的最主要的難題是尋找一種高效、低毒的基因轉(zhuǎn)染載體,將基因藥物導(dǎo)入特定的細(xì)胞中,并能穩(wěn)定地維持其功能。目前,基因載體一般分為病毒載體和非病毒載體。而陽離子脂質(zhì)體是非病毒載體中最有潛力的基因載體之一。
　　 本論文以氨基酸為原料,經(jīng)月桂醇或正辛醇的酯化反應(yīng)、氯乙酰氯酰胺化反應(yīng)和季銨化反應(yīng),合成了一系列包括Glu-C12、TMA-C2-Glu—C12、TMA-

2、C2-Glu-C8、TMA-C2-β-Ala-C12、TMA-C2-Val-C12、TMA—C2-Met-C12、TMA-C2-Gly-C12和TMA-C2-Asp-C12在內(nèi)的八種氨基酸類陽離子脂質(zhì)。
　　 采用超聲波分散技術(shù),用二次蒸餾水將自合成的陽離子脂質(zhì)分散成陽離子脂質(zhì)體,再將脂質(zhì)體與EGFP質(zhì)粒混合制備成脂質(zhì)體/EGFP質(zhì)粒復(fù)合物。用Zetasizer Nano ZS激光粒度儀測定了各陽離子脂質(zhì)體和脂質(zhì)體/EGFP質(zhì)粒

3、復(fù)合物的平均粒徑、粒徑分布和zeta電位。調(diào)節(jié)復(fù)合物的N/P比,使zeta電位與平均粒徑等物理結(jié)構(gòu)參數(shù)滿足最佳的細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件。
　　 以制備的各種陽離子脂質(zhì)體為基因載體,裝載EGFP質(zhì)粒,對HEK293細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,并采用商用轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineaTm2000(Lipo2000)進(jìn)行陽性對照。實驗結(jié)果表明,由β-丙氨酸、L-纈氨酸、L-甲硫氨酸和甘氨酸制備的含單一疏水長鏈的陽離子脂質(zhì)體TMA-C2-β-

4、Ala-C12、TMA—C2—Val—C12、TMA-C2-Met—C12、TMA-C2-Gly-C12,不論任何N/P比都沒有轉(zhuǎn)染效率。而含雙疏水長鏈的陽離子脂質(zhì)體卻具有較好的轉(zhuǎn)染效率,且谷氨酸型陽離子脂質(zhì)體TMA-C2-Glu-C12的轉(zhuǎn)染效率高于天冬氨酸型陽離子脂質(zhì)體TMA-C2-Asp-C12。但是,疏水鏈長度為8個碳原子的脂質(zhì)體TMA-C2-Glu-C8和不含季銨鹽頭基及連接臂的脂質(zhì)體Glu-C12沒有轉(zhuǎn)染效率。
　　

5、 以脂質(zhì)體TMA-C2-Glu-C12為基因載體,裝載EGFP質(zhì)粒,對HEK293、HBL100、293FT、A549、GC-1、Ges-1、HT1080、HUVEC、U251、3T3-L1、SW-480、NIH3T3、HeLa、MCF-7和Hct116十五種細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染。用MTT法檢測該脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性。實驗結(jié)果表明,脂質(zhì)體TMA-C2-Glu-C12能適用于大多數(shù)細(xì)胞系,且轉(zhuǎn)染效率與Lipo2000相當(dāng),甚至優(yōu)于Lipo2000,