多西他賽陽離子脂質體的研究.pdf

1、多西他賽(docetaxel)是一種半合成的紫杉類衍生物，為細胞周期特異性廣譜抗癌藥。雖然多西他賽具有很高的抗癌活性，但是其水溶性差大大限制了多西他賽的發(fā)展應用。市售制劑泰索帝含大量吐溫-80，會引發(fā)嚴重不良反應，應用前須多次服用糖皮質激素類藥物以防過敏反應和液體潴留，臨床應用不便，所以有必要開發(fā)一種新的劑型以改善多西他賽的溶解性能。
　　陽離子脂質體早期作為基因載體廣泛應用于基因轉染和基因治療的研究，近來也有學者將陽離子脂質體作

2、為抗腫瘤藥物的載體展開研究。陽離子脂質體通常是由一種陽離子兩親性化合物和一種中性磷脂組成的封閉囊泡，磷脂分子的疏水尾部聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相。如將多西他賽扦插于磷脂雙分子層疏水尾部之間，則會避開與水的直接接觸，提高在水中的溶解度。
　　腫瘤新生血管生長快速，其內皮細胞表面攜帶的負電荷遠大于普通靜態(tài)血管，陽離子脂質體可以通過靜電作用與腫瘤新生血管內皮細胞相互作用，被迅速吞噬，同時破壞內吞小體的脂膜，將藥物釋放到胞

3、漿中，加快藥物從胞漿到細胞核的轉運速度。這種機制顯著提高了藥物在腫瘤區(qū)的聚集和釋放。
　　目的：
　　本研究將多西他賽載入含陽離子磷脂的的脂質體中，以提高多西他賽的溶解度和治療效果，并對所得制劑的體內藥動學及體內外藥效學進行考察。
　　方法：
　　建立主要組成材料多西他賽、DOTAP-Cl、DOPC的含量以及包封率測定方法并進行方法學驗證。
　　多西他賽陽離子脂質體的制備方法采用乙醇注入法，載藥方式為被動載

4、藥。選擇DOTAP-Cl（1,2-二油酰基羥丙基-3-N,N,N-三甲胺氯）和DOPC（1,2-二油酰磷脂酰膽堿）作為組成磷脂，二水海藻糖溶液作為水相，多西他賽和磷脂溶于乙醇作為脂相，將脂相滴注于水相中攪拌即形成脂質體。將脂質體通過聚碳酸酯膜擠出以達到合適粒度，并將擠出后的脂質體進行凍干以進一步提高脂質體的穩(wěn)定性。
　　針對制備過程中可能影響藥物穩(wěn)定性的因素設計單因素試驗。以脂質體粒徑分布和包封率為指標，考察了磷脂組成、脂相濃度、

5、水相糖溶液濃度、水相 pH、脂相與水相比例和注入速度對脂質體物理性質的影響。最終確定多西他賽陽離子脂質體最佳處方和工藝條件。
　　對在最佳處方和工藝下制備的脂質體進行質量研究，主要包括外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、Zeta電位、包封率和含量等指標的測定。考察多西他賽陽離子脂質體混懸液24 h的穩(wěn)定性和凍干品6個月的穩(wěn)定性。
　　建立血漿中多西他賽和DOTAP-Cl的檢測方法并進行了方法學驗證。以雄性 Wistar大鼠為實驗

6、動物進行了藥代動力學試驗，對多西他賽陽離子脂質體體內行為進行了初步探索。分別尾部靜脈注射多西他賽陽離子脂質體和泰索帝，給藥劑量均為4 mg·kg-1，給藥速度為12mg·kg-1·min-1。
　　MTT法進行體外藥效試驗，試驗組包括多西他賽陽離子脂質體、空白陽離子脂質體和泰索帝。考慮到多西他賽臨床主要應用于乳腺癌、卵巢癌和肺癌的治療，采用 MCF-7細胞（人乳腺癌）和 A549細胞（人肺腺癌細胞）。
　　在雌性BDF1小鼠

7、左前肢腋部皮下接種LLC細胞（小鼠肺癌細胞）長成實體瘤，以此為動物模型進行多西他賽陽離子脂質體體內藥效學研究，比較了多西他賽陽離子脂質體、空白陽離子脂質體和泰索帝的腫瘤抑制率。
　　結果：
　　通過試驗確定最佳處方為：DOTAP-Cl、DOPC和多西他賽的摩爾比為50:43:7；總脂相濃度為1500 mM；水相為110 g/L的二水海藻糖溶液（pH4.5-5.5）；脂相和水相體積比為1:74，注入速度為1.0 mL/min；

8、注入結束后進行擠出整粒；以水相為透析液透析八倍體積后分裝凍干，冷藏儲存。
　　以最佳處方和工藝制備的脂質體為均一的白色凍干物，加水10 mL輕輕搖晃可快速復溶。三批平行樣品復溶后物理性質接近，粒徑為160 nm，粒度分布良好（PDI<0.1），pH（5.0）和滲透壓（310 mOsmol/Kg）符合注射劑標準，多西他賽濃度可達1 mg/mL，包封率高達98％以上。脂質體復溶后在冷藏或冷凍條件下24 h內可保持穩(wěn)定性，脂質體凍干品冷

9、藏儲存6個月后各項指標均無明顯變化。
　　藥代動力學試驗結果顯示，多西他賽陽離子脂質體的多西他賽濃度-時間曲線與泰索帝相似，均在輸液開始后1 min即達到最大值，隨后迅速下降。而DOTAP-Cl濃度-時間曲線則在30 min時達到最高點，且5 min-60 min時間內濃度浮動不大，隨后下降也較為緩和。
　　體外藥效試驗結果顯示，多西他賽陽離子脂質體、空白陽離子脂質體和泰索帝對 MCF-7細胞和 A549細胞均有抑制作用。在

10、低濃度范圍內多西他賽陽離子脂質體抑制效果穩(wěn)定且優(yōu)于泰索帝。
　　體內藥效學試驗結果顯示，試驗結束時，多西他賽陽離子脂質體、泰索帝和空白陽離子脂質體對LLC細胞瘤的抑制率分別為為58.1%、29.6%及12.9%。多西他賽陽離子脂質體治療效果顯著優(yōu)于泰索帝（P<0.01）。
　　結論：
　　陽離子脂質體工藝過程簡單易控、多西他賽濃度達、包封率高、物理性質穩(wěn)定；脂質體所含的多西他賽與泰索帝具有相似的體內藥代動力學特征，剩余