兩種疏水改性乙二醇?xì)ぞ厶亲跃奂{米粒在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用研究.pdf

1、乙二醇?xì)ぞ厶鞘且环N殼聚糖衍生物，它能夠在任何pH值的水溶液中溶解，具有殼聚糖的生物相容性、生物降解性、低免疫原性、生物活性等特點(diǎn)。本文選擇乙二醇?xì)ぞ厶亲鳛槟阁w聚合物，通過引入不同的疏水基團(tuán)，合成了一系列具有不同物理化學(xué)性質(zhì)的兩親性乙二醇?xì)ぞ厶蔷酆衔?。這種兩親性聚合物能在水溶液中通過分子內(nèi)及分子間的疏水作用力形成自聚集納米粒。這種納米粒具有核-殼結(jié)構(gòu)，疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼，疏水性的內(nèi)核可以作為藥物的儲(chǔ)庫，因此可以用作疏水性藥物的載體

2、。 本文采用二步反應(yīng)將膽固醇接枝到乙二醇?xì)ぞ厶?，首先將膽固醇進(jìn)行羧基化，將膽固醇與琥珀酸酐反應(yīng)生成膽固醇半琥珀酸酯（CHS），然后用1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）與N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）作為偶聯(lián)劑，將膽固醇半琥珀酸酯的羧基與乙二醇?xì)ぞ厶侵麈湹陌被M(jìn)行反應(yīng)，得到膽固醇疏水改性乙二醇?xì)ぞ厶枪簿畚铮–HGC）。利用紅外光譜、核磁共振、元素分析法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。通過控制膽固醇半琥珀酸酯與乙二醇?xì)ぞ厶堑?/p>

3、反應(yīng)投料比例，合成三種不同取代度的聚合物。兩親性的乙二醇?xì)ぞ厶窃谒芤褐型ㄟ^探頭超聲作用下自聚集形成單分散性的納米粒，共聚物在水溶液中的最低臨界聚集濃度（CAC）通過芘熒光探針法測(cè)定，隨著共聚物中疏水取代基團(tuán)含量的增多，CAC值降低。納米粒的形態(tài)采用透射電子顯微鏡（TEM）來觀察，粒徑大小采用動(dòng)態(tài)光散射法（DLS）測(cè)定。CHGC自聚集納米粒的形態(tài)呈球形，粒徑在228～353 nm。以吲哚美辛（indomethacin，IND）為模型藥物

4、，體外評(píng)價(jià)載藥IND-CHGC納米粒的性質(zhì)。采用透析法制備載藥IND-CHGC納米粒，納米粒的形態(tài)呈球形，且粒徑比空白納米粒更大。載藥納米粒體外釋放行為表明，藥物釋放符合Weibull釋放模型，呈兩相釋藥。穩(wěn)定性研究表明，凍干或低溫有利于載藥納米粒的保存。 基于兩親性的CHGC自聚集納米粒性質(zhì)，選用阿霉素（doxorubicin，DOX）作為模型藥物，制備載阿霉素CHGC納米粒，使其成為一種“隱形”的長循環(huán)納米粒，并可通過增強(qiáng)滯

5、留和滲透（enhanced permeability and retention，EPR）效應(yīng)提高靶向治療腫瘤的目的。以CHGC1（取代度為6．7％）為載體材料，采用透析法制備載藥納米粒（DCN），隨著阿霉素投藥量的增加，納米粒的載藥量也增加，但包封率隨之降低。載藥納米粒的形態(tài)呈球形，隨著載藥量的增大，納米粒的粒徑增大。應(yīng)用差示掃描量熱法（DSC）和熒光淬滅方法測(cè)定阿霉素在納米粒中的分布狀態(tài)，結(jié)果表明阿霉素包裹在納米粒里面，并且以無定型

6、或分子狀態(tài)存在。載藥納米粒DCN的zeta電位大小與分散介質(zhì)的pH值有一定關(guān)系，分散介質(zhì)的pH值越低，zeta電位越大。研究載藥納米粒DCN在pH5．5、6．5、7．4的PBS釋放介質(zhì)中的體外釋放行為，結(jié)果表明，載藥納米粒隨著載藥量的增大藥物釋放速度減慢，在pH值越低的條件下，藥物釋放越快。在體外37℃的PBS（pH7．4）條件下，阿霉素包裹在納米粒中比較穩(wěn)定，然而游離阿霉素不穩(wěn)定容易發(fā)生降解，穩(wěn)定性研究表明，載藥納米粒DCN應(yīng)凍干保存

7、。 建立了高效液相色譜（HPLC）測(cè)定阿霉素在血漿樣品和組織樣品中含量的方法。大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果顯示，DCN-16（載藥量為9．36％）可以顯著延長阿霉素的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。與阿霉素組比較，DCN-16可以延長平均滯留時(shí)間（MRT）（P<0．01）和降低體內(nèi)消除率（CL）（P<0．01），其藥-時(shí)曲線下面積（AUC0-∞）為阿霉素組的5．61倍（P<0．01）。DCN-16能夠延長在荷S180瘤小鼠血漿中的時(shí)間，增加阿霉素在腫瘤

8、內(nèi)的分布，DCN-16在腫瘤組織中的AUC0-∞是阿霉素組的2．56倍（P<0．05），表明載藥納米粒具有長循環(huán)的特性和腫瘤靶向作用。DCN-16組在肝臟、脾臟中的AUC0-∞均大于阿霉素組（P<0．05），DCN-16組在心臟、肺臟、腎臟的AUC0-∞均比阿霉素組?。≒<0．05），說明載藥納米粒能夠降低心臟和腎臟的毒性，同時(shí)也說明納米粒能夠在體內(nèi)長時(shí)間滯留。載藥納米粒DCN-16在腫瘤組織中的相對(duì)攝取率（Re）和峰濃度比（Ce）分別

9、為2．56±0．30和1．49±0．24，表明載藥納米粒DCN-16對(duì)S180腫瘤的趨向性大于阿霉素。 采用四甲基氮唑藍(lán)比色（MTT）法考察了空白CHGC1納米粒與載藥納米粒DCN-16對(duì)MCF-7細(xì)胞和HepG2細(xì)胞生長的影響?？瞻證HGC1納米粒對(duì)MCF-7細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的IC50值分別為0．226 mg/mL和0．351 mg/mL，說明CHGC1納米粒具有較低的細(xì)胞毒性。阿霉素和DCN-16對(duì)細(xì)胞的毒性均具有濃度依

10、賴性。載藥納米粒DCN-16對(duì)MCF-7細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的體外毒性均弱于游離阿霉素。激光共聚焦顯微鏡結(jié)果表明，DCN-16的細(xì)胞攝取是通過內(nèi)吞途徑，而游離阿霉素的細(xì)胞攝取是通過被動(dòng)擴(kuò)散的方式。流式細(xì)胞儀測(cè)定阿霉素與HepG2細(xì)胞孵育05h或4h時(shí)的熒光強(qiáng)度強(qiáng)于DCN-16的熒光強(qiáng)度，與CLSM觀察結(jié)果一致，這也與載藥納米粒DCN-16的體外緩慢釋放的有關(guān)。體內(nèi)抗S180肉瘤小鼠實(shí)驗(yàn)表明，DCN-16組的抑瘤瘤大于阿霉素組的抑瘤率，并

11、且毒副作用更低。 應(yīng)用酶降解和超濾膜分離技術(shù)制備低分子量的乙二醇?xì)ぞ厶恰Ｒ訣DC作為偶聯(lián)劑，將亞油酸（LA）接枝到低分子量的乙二醇?xì)ぞ厶牵铣蓙営退崾杷男砸叶細(xì)ぞ厶牵↙ALGC）共聚物，利用紅外光譜、核磁共振、膠體滴定法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。通過控制亞油酸的投料比例，合成三種不同取代度（4．5％～13．4％）的聚合物。LALGC共聚物在水溶液中通過探頭超聲作用下自聚集形成單分散性的納米粒，納米粒的形態(tài)呈球狀，平均粒徑在204～2

12、89 nm范圍內(nèi)，CAC與納米粒的粒徑大小隨著共聚物的疏水基團(tuán)取代度的增加而降低。應(yīng)用透析法將紫杉醇包裹LALGC自聚集納米粒中，載藥納米粒（PTX-LALGC）的載藥量與包封率隨著聚合物取代度的增加而增加。載藥納米粒的粒子形態(tài)呈球形，粒徑在238～307 nm范圍內(nèi)。載藥納米粒的體外釋放的結(jié)果表明，隨著納米粒載藥量的增加，藥物釋放速度減慢，藥物從納米粒中釋放呈兩相模式，即初始的藥物快速釋放和后期的藥物緩慢釋放。應(yīng)用MTT法研究載藥納米