去甲萬古霉素鍵合手性整體柱的制備及在毛細管電色譜中的應(yīng)用.pdf

1、隨著生命科學和環(huán)境化學對單一構(gòu)型異構(gòu)體需求的增長，手性分離越來越引起人們的廣泛關(guān)注，已經(jīng)成為分離領(lǐng)域研究的重點課題之一。因此，為檢測生物和環(huán)境樣品中痕量手性化合物及研究手性藥物的藥代動力學、臨床藥理學和環(huán)境毒理學作用，建立和發(fā)展一種靈敏、快速、高效的分離分析方法至關(guān)重要。毛細管電色譜(CEC)作為一種選擇性好、柱效高、試劑消耗少、分析速度快的分離技術(shù)在此凸顯其優(yōu)越性。整體材料因制備方法簡單、滲透性好、比表面積高等優(yōu)點，成為一種前景廣闊的

2、CEC固定相。然而，商品化CEC的濃度檢測靈敏度低，導致手性分離范圍受限，無法滿足現(xiàn)代手性分離科學發(fā)展的需要。以整體柱在線聯(lián)用直接富集分離痕量手性化合物的技術(shù)未見報道。此外，常規(guī)水解溶膠.凝膠法在制備CEC手性整體柱時因步驟繁瑣、耗時、柱壽命短等問題，在相當程度上限制了CEC手性分離技術(shù)的進一步發(fā)展，以非水溶膠-凝膠法原位制備手性整體固定相的方法迄今亦未見報道。本論文針對生物及環(huán)境樣品中手性化合物分離和檢測的需要，以CEC為依托，研究了

3、去甲萬古霉素(NVC)鍵合手性整體柱評價的新方法，建立了C8富集柱與NVC手性整體柱在線偶聯(lián)樣品預富集的新技術(shù)，提出了室溫下基于非水溶膠-凝膠反應(yīng)原位制備手性整體固定相的新方法，并應(yīng)用于生物樣品中痕量手性化合物的分析。本論文的主要內(nèi)容和創(chuàng)新點表現(xiàn)在以下幾個方面：
　　 1、研究了NVC鍵合手性整體柱評價的新方法，發(fā)現(xiàn)該種柱子在CEC兩種模式下均具有優(yōu)良的分離性能。在極性有機模式下，實現(xiàn)了普萘洛爾和烯丙洛爾對映體的分離，且電滲流(

4、EOF)在8.0 kV電壓時達到2.4×10-4 cm2V-1s-1。連續(xù)平行測量7次，EOF的相對標準偏差為0.4％；連續(xù)3天測量，EOF的相對標準偏差為3.4％；不同批次整體柱間，EOF的相對標準偏差為10.2％。在反相模式下，成功分離了吲噠帕胺、安息香、沙利度胺和華法令四種對映體。其中，沙利度胺對映體的柱效達到132737和42265塔板/米，分離度超過5.78。EOF在10.0 kV電壓時達到2.4×10-4cm2 V-1s-1

5、。在兩種模式下產(chǎn)生的EOF均比文獻報道的數(shù)值大，且單根NVC鍵合手性整體柱可以連續(xù)使用600次以上。上述初步研究表明，NVC鍵合手性整體柱具有EOF更大、分離度更好、柱效更高、柱壽命更長的優(yōu)點，具有較好的應(yīng)用前景。
　　 2、建立了硅膠基質(zhì)C8整體柱與NVC手性整體柱在線偶聯(lián)樣品預富集的新技術(shù)。通過巧妙地選用C8-NVC聯(lián)用的氟化乙丙烯接口，成功實現(xiàn)了人體尿液和Sprague-Dawley大鼠給藥后的血清中痕量沙利度胺對映體的分

6、析。在優(yōu)化的實驗條件下進樣34.8 mm，(R)-和(S)-沙利度胺異構(gòu)體的檢測靈敏度分別提高278和298倍，且兩異構(gòu)體的濃度在0.5～50 mg L-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性，檢出限分別為90 μg L-1和94 μg L-1。對10 mg L-1的沙利度胺對映體連續(xù)5次進樣，遷移時間和峰高的相對標準偏差分別為0.8％～0.9％和1.1％～2.3％。結(jié)果表明，C8-NVC整體柱在線偶聯(lián)樣品預富集技術(shù)具有操作簡便、靈敏度高、實驗成

7、本低、環(huán)境友好等優(yōu)點。
　　 3、提出了基于非水溶膠-凝膠反應(yīng)室溫下原位制備手性整體固定相的新方法，為遇水反應(yīng)或水溶性差的單體參與反應(yīng)提供了一種新思路。NVC與(3-異氰酸酯基丙基)-三乙氧基硅烷先通過熱引發(fā)聚合(70℃，6 h)，然后在室溫條件下加入到四甲氧基硅烷(TMOS)與甲酸(HCOOH)組成的非水溶膠-凝膠反應(yīng)液中(TMOS/HCOOH，1：2，v/v)，以CTAB為致孔劑，制備了含有NVC官能團的有機-無機雜化手性整