胡蘿卜肉質(zhì)根發(fā)育過(guò)程中激素和品質(zhì)的變化規(guī)律研究.pdf

1、胡蘿卜（Daueus carota L.），傘形科二年生草本植物，是重要的根菜類蔬菜作物。胡蘿卜的主要食用器官是肉質(zhì)根，其生長(zhǎng)發(fā)育的好壞直接決定著胡蘿卜的產(chǎn)量和品質(zhì)。肉質(zhì)根的形成和膨大是一個(gè)包括結(jié)構(gòu)變化、物質(zhì)積累和基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，這個(gè)過(guò)程直接或間接地受到植物激素的調(diào)控。目前，植物激素在胡蘿卜生長(zhǎng)發(fā)育中，特別是肉質(zhì)根發(fā)育中的積累規(guī)律以及其具體的作用還不清楚，另外，在胡蘿卜肉質(zhì)根中，從分子生物學(xué)上揭示抗壞血酸、木質(zhì)素等品質(zhì)指標(biāo)形成的機(jī)理

2、還未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)分離和鑒定胡蘿卜肉質(zhì)根發(fā)育過(guò)程中的差異表達(dá)基因，探討激素相關(guān)基因在肉質(zhì)根發(fā)育過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄水平變化;采用NormFinder、geNorm和BestKeeper等軟件對(duì)候選內(nèi)參基因的表達(dá)進(jìn)行穩(wěn)定性分析，篩選出用于胡蘿卜發(fā)育過(guò)程中的內(nèi)參基因;采用形態(tài)生理、解剖結(jié)構(gòu)、細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)等方法，研究?jī)?nèi)源激素、抗壞血酸乖木質(zhì)素在不同發(fā)育階段的積累情況和調(diào)控機(jī)制;以肉質(zhì)根為試材噴施外源赤霉素，研究赤霉素對(duì)胡蘿卜肉

3、質(zhì)根生長(zhǎng)發(fā)育和品質(zhì)形成的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　1、以4個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段的胡蘿卜根為試驗(yàn)材料，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，共得到160，227個(gè)transcripts，32，716個(gè)unigenes，平均長(zhǎng)度為1，453 bp。不同發(fā)育階段共發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的unigenes4，818個(gè)，其中87個(gè)與激素相關(guān)，激素調(diào)控胡蘿卜根生長(zhǎng)具有階段性的鮮明特征。
　　2、采用NormFinder、geNorm和BestKeeper3個(gè)不同軟件對(duì)9

4、個(gè)候選內(nèi)參基因(ACTIN、 EF-1α、eIF-4α、GAPDH、PP2A、AND、TIP41、TUB和UBQ）的表達(dá)進(jìn)行穩(wěn)定性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，候選內(nèi)參基因在不同發(fā)育階段以及不同組織內(nèi)的穩(wěn)定性差異較大。ACTI是根和葉生長(zhǎng)過(guò)程中最穩(wěn)定的基因，相反，GAPDH被認(rèn)為是最不穩(wěn)定的基因，不適合用來(lái)作為胡蘿卜內(nèi)參基因。推薦AC TIN或ACTIN與EF-1α、eIF-4α、TUB和UBQ等組合作為胡蘿卜發(fā)育過(guò)程中的內(nèi)參基因。
　　3、采

5、用形態(tài)以及解剖結(jié)構(gòu)等方法對(duì)胡蘿卜發(fā)育的5個(gè)階段進(jìn)行了研究，測(cè)定了胡蘿卜不同組織的赤霉素、細(xì)胞分裂素和茉莉酸甲酯含量，并對(duì)這些激素合成和信號(hào)途徑相關(guān)的基因進(jìn)行了表達(dá)分析。研究發(fā)現(xiàn)，這些基因均能響應(yīng)胡蘿卜生長(zhǎng)發(fā)育，且一些基因的表達(dá)具有明顯的組織特異性。大多數(shù)基因的表達(dá)趨勢(shì)與激素含量的變化并不一致，說(shuō)明激素的積累和響應(yīng)可能受到復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)。結(jié)果說(shuō)明，赤霉素、細(xì)胞分裂素和茉莉素可能在胡蘿卜生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　4、為了深

6、入了解抗壞血酸在胡蘿卜中積累的調(diào)控機(jī)制，確定其代謝調(diào)控的關(guān)鍵基因。以胡蘿卜‘黑田五寸’肉質(zhì)根為試驗(yàn)材料，克隆了21個(gè)與抗壞血酸相關(guān)的基因，并對(duì)其在胡蘿卜肉質(zhì)根發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，胡蘿卜根中抗壞血酸的積累可能由復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行調(diào)節(jié)，其中，L-半乳糖途徑可能是抗壞血酸生物合成的主要途徑。在根發(fā)育過(guò)程中，編碼L-半乳糖-1-磷酸酯酶和L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯脫氫酶的基因轉(zhuǎn)錄水平與抗壞血酸含量密切相關(guān)。
　　5、對(duì)野

7、生型和栽培型胡蘿卜5個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的根進(jìn)行取樣并進(jìn)行木質(zhì)素測(cè)定，用組織化學(xué)染色和熒光自發(fā)等技術(shù)對(duì)木質(zhì)素的分布情況進(jìn)行分析，并利用轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析木質(zhì)素合成相關(guān)基因和它們的表達(dá)。結(jié)果表明木質(zhì)素大部分沉積在胡蘿卜木質(zhì)部導(dǎo)管的細(xì)胞壁上，胡蘿卜發(fā)育過(guò)程中，木質(zhì)素含量呈現(xiàn)連續(xù)下降的趨勢(shì)，這可能與木質(zhì)素生物合成相關(guān)基因表達(dá)量的降低有關(guān)。
　　6、以胡蘿卜根為研究材料，施加外源赤霉素，并對(duì)胡蘿卜植株生長(zhǎng)特別是根的生長(zhǎng)、木質(zhì)部發(fā)育和木質(zhì)素積累等進(jìn)行