一株紅球菌對鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯的降解及二苯并呋喃雙加氧酶基因的克隆與表達.pdf

1、鄰苯二甲酸酯類及二噁英類都屬于環(huán)境激素類物質(zhì)，鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)廣泛應(yīng)用于塑料制品，二噁英類主要產(chǎn)生于垃圾焚燒中，這些物質(zhì)不斷釋放自然環(huán)境中，不僅污染環(huán)境，同時也對人體健康構(gòu)成巨大威脅。
　　本文以土壤分離菌株Rhodococcus sp.strain p52為材料，對其降解鄰苯二甲酸酯類中代表性化合物鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯(DEHP)的能力進行了相關(guān)研究，結(jié)果表明Rhodococcus sp.strain p52在9天時間

2、里對初始濃度為200mg/L的DEHP的降解率達到75％，另外正交實驗結(jié)果表明環(huán)境因子對DEHP降解率的影響程度如下:DEHP初始濃度＞溫度＞pH。
　　Rhodococcus sp.strain p52中含有兩套能夠以有角度方式代謝二苯并呋喃(DF)的雙加氧酶系統(tǒng)，其編碼基因簇分別為dbfA和dfdA，本文分別對dbfA基因簇中的末端加氧酶dbfA1A2基因、dfdA基因簇中的鐵氧還蛋白dfdA3基因和鐵氧還蛋白還原酶dfdA4

3、基因進行了克隆及表達分析。通過SDS-PAGE實驗檢測表達產(chǎn)物，表明dbfA1A2基因表達產(chǎn)物中含有兩條帶，分別代表末端加氧酶大小亞基dbfA1及dbfA2基因表達產(chǎn)物，其大小分別在65KDa及22KDa左右，并且主要以包涵體形式存在于大腸桿菌BL21(DE3)宿主細(xì)胞中;dfdA3基因表達蛋白大小在33KDa左右，表達產(chǎn)物主要以可溶性蛋白形式存在;dfdA4基因表達蛋白大小在65KDa左右，其表達蛋白主要以包涵體形式存在。
　　

4、在以上基礎(chǔ)上，本文還初步探討了含dbfAlA2基因的重組大腸桿菌BL21(DE3)對二苯并呋喃(DF)的降解能力，結(jié)果表明，該菌株在18h內(nèi)對初始濃度為200mg/L的DF去除率達到90％以上，初步證明了dbfA1A2基因表達產(chǎn)物在催化降解DF方面的重要作用。
　　綜上，Rhodococcus sp.strain p52對DEHP具有一定的降解能力，對于鄰苯二甲酸酯類造成的環(huán)境污染表現(xiàn)出潛在的生物修復(fù)能力。二苯并呋喃雙加氧酶相關(guān)基