池蝶蚌脂多糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子LITAF基因的克隆及對(duì)Hela細(xì)胞的凋亡效應(yīng).pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：405604411013南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文池蝶蚌脂多糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子池蝶蚌脂多糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子LITAF基因的克基因的克隆及對(duì)隆及對(duì)Hela細(xì)胞的凋亡效應(yīng)細(xì)胞的凋亡效應(yīng)CloningofLPSinducedTNFαfact(LITAF)fromfreshwaterpearlmusselHyriopsisschlegeliiitsapoptoticeffectonHelacells王誠(chéng)遠(yuǎn)培養(yǎng)單位

2、（院、系）：生命科學(xué)與食品工程學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：洪一江教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門(mén)類：理學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：動(dòng)物學(xué)論文答辯日期：2014年5月27日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2014年月日摘要III摘要脂多糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子（LipopolysacideinducedTNFαfactLITAF）是一類新發(fā)現(xiàn)的重要的轉(zhuǎn)錄因子，該因子介導(dǎo)TNFα和各種炎癥因子的表達(dá)，在先天性免疫中扮演著重要的角色。目前，我們克隆了池蝶蚌LITAF基因的的cDNA

3、序列（定義為HsLITAF）。結(jié)果顯示該cDNA序列包含453個(gè)核苷酸的開(kāi)放閱讀框，編碼150個(gè)氨基酸，同已知物種的LITAF序列具有34%73.3%的氨基酸同源性。該推導(dǎo)的HsLITAF多肽分子質(zhì)量為16.08KDa，等電點(diǎn)為8.04。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)HsLITAF在C末端有完整的LITAF功能域，包含兩個(gè)CXXC模式域且該結(jié)構(gòu)形成Zn2指結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增該段基因的上下游引物是相同的，且在池蝶蚌閉殼肌、斧足、性腺、肝胰腺、鰓、外套

4、膜和血淋巴等組織中都檢測(cè)到除上述之外的另外一種形式，兩種形式分別命名為L(zhǎng)ITAF1和LITAF2，且兩種形式的cDNA序列在數(shù)量上只相差24個(gè)堿基和9個(gè)氨基酸。用該引物檢測(cè)基因組，未發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子。熒光定量結(jié)果顯示HsLITAF在鰓中表達(dá)量最高，在肝胰腺，血淋巴，閉殼肌和性腺中表達(dá)量適中，而在心臟和外套膜中表達(dá)量最低。在LPS刺激后，血淋巴HsLITAF表達(dá)量在6h、24h和48h降低，但是在刺激72h后，其表達(dá)量顯著性地上調(diào)且為對(duì)照組的3

5、9倍。推測(cè)池蝶蚌LITAF參與了先天性免疫反應(yīng)。為了進(jìn)一步研究HsLITAF的生物學(xué)功能，我們構(gòu)建了pcDNA3.1（）HsLITAF表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染進(jìn)Hela細(xì)胞。流式細(xì)胞儀及RTPCR分析顯示實(shí)驗(yàn)組Hela細(xì)胞發(fā)生更高的凋亡率，并顯著上調(diào)凋亡基因p53及Bax的表達(dá)，是對(duì)照組的2.99倍和2.53倍。據(jù)此，我們推測(cè)線粒體可能參與了LITAF誘導(dǎo)的凋亡。該研究為了解HsLITAF的功能及誘導(dǎo)凋亡的信號(hào)通路提供了新視角。關(guān)鍵詞鍵詞:池蝶