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文檔簡(jiǎn)介
1、豚鼠是研究人哮喘病、結(jié)核病等呼吸道疾病的理想動(dòng)物模型之一。同時(shí),豚鼠也是研究肺臟的先天免疫機(jī)制和呼吸道疾病的致病機(jī)理的常用模型。因此,本研究對(duì)豚鼠肺臟發(fā)育過程中上皮細(xì)胞的發(fā)育及其Toll樣受體(TLRs)信號(hào)表達(dá)進(jìn)行了初步的研究。
本研究利用組織化學(xué)染色(HE)和免疫組織化學(xué)(IHC)染色方法對(duì)不同發(fā)育時(shí)期豚鼠呼吸道主要上皮細(xì)胞的類型與組成進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察,并對(duì)TLRs信號(hào)分子的發(fā)育表達(dá)利用定量反轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR
2、)和免疫印跡(WB)法進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,在胚胎(Embryonic)發(fā)育到45d和52d時(shí),豚鼠肺臟分別處于假腺期和小管期;在胚胎發(fā)育到59d至出生前,肺臟呈現(xiàn)為肺泡增多的囊狀期;在出生后7d至成年期(3個(gè)月),豚鼠肺臟發(fā)育處于肺泡期。IHC結(jié)果表明,在胚胎發(fā)育的第45d,肺臟存在具有多能性的基底細(xì)胞和肺泡Ⅱ型細(xì)胞,當(dāng)胚胎發(fā)育到52d時(shí),即肺臟發(fā)育的小管期,可以觀察到纖毛細(xì)胞和Clara細(xì)胞。熒光定量PCR分析結(jié)果表明,在出生后3個(gè)
3、月(成年)、28d、14d、7d和0d,以及胚胎期E45d、E52d和E59d的不同發(fā)育階段,豚鼠肺臟中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、MyD88和TRAF6,這11種TLR相關(guān)信號(hào)均有表達(dá),但在出生前,各因子的表達(dá)量相對(duì)高于出生后。其中,在胚胎期E45d、E52d和E59d的豚鼠肺臟組織中,TLR1-10總體的表達(dá)水平為顯著遞增趨勢(shì),E52d時(shí),TLR4表達(dá)量最高,E45d表
4、達(dá)量次之;在E52d和E59d時(shí),TRAF6和MyD88相對(duì)表達(dá)量最高;而在出生后到成年(3個(gè)月)期,各因子的表達(dá)量顯著降低,且出生后的不同時(shí)期,同一因子間的表達(dá)差異不顯著。同時(shí),利用蛋白免疫印跡WesternBlotting技術(shù)在蛋白質(zhì)水平進(jìn)一步對(duì)上述因子的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證。上述結(jié)果表明,豚鼠肺臟在發(fā)育過程中,隨著上皮細(xì)胞的增殖和分化,肺臟在形態(tài)學(xué)和功能上趨于成熟。TLRs在出生前的增高現(xiàn)象在分子水平提示豚鼠肺臟出生前的形態(tài)功能成熟性,
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