豚鼠肺臟上皮細(xì)胞形成及Toll樣受體(TLR)信號因子的發(fā)育表達(dá).pdf

1、豚鼠是研究人哮喘病、結(jié)核病等呼吸道疾病的理想動物模型之一。同時，豚鼠也是研究肺臟的先天免疫機(jī)制和呼吸道疾病的致病機(jī)理的常用模型。因此，本研究對豚鼠肺臟發(fā)育過程中上皮細(xì)胞的發(fā)育及其Toll樣受體(TLRs)信號表達(dá)進(jìn)行了初步的研究。
　　 本研究利用組織化學(xué)染色(HE)和免疫組織化學(xué)(IHC)染色方法對不同發(fā)育時期豚鼠呼吸道主要上皮細(xì)胞的類型與組成進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察，并對TLRs信號分子的發(fā)育表達(dá)利用定量反轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR

2、)和免疫印跡(WB)法進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，在胚胎(Embryonic)發(fā)育到45d和52d時，豚鼠肺臟分別處于假腺期和小管期;在胚胎發(fā)育到59d至出生前，肺臟呈現(xiàn)為肺泡增多的囊狀期;在出生后7d至成年期（3個月），豚鼠肺臟發(fā)育處于肺泡期。IHC結(jié)果表明，在胚胎發(fā)育的第45d，肺臟存在具有多能性的基底細(xì)胞和肺泡Ⅱ型細(xì)胞，當(dāng)胚胎發(fā)育到52d時，即肺臟發(fā)育的小管期，可以觀察到纖毛細(xì)胞和Clara細(xì)胞。熒光定量PCR分析結(jié)果表明，在出生后3個

3、月（成年）、28d、14d、7d和0d，以及胚胎期E45d、E52d和E59d的不同發(fā)育階段，豚鼠肺臟中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、MyD88和TRAF6，這11種TLR相關(guān)信號均有表達(dá)，但在出生前，各因子的表達(dá)量相對高于出生后。其中，在胚胎期E45d、E52d和E59d的豚鼠肺臟組織中，TLR1-10總體的表達(dá)水平為顯著遞增趨勢，E52d時，TLR4表達(dá)量最高，E45d表

4、達(dá)量次之;在E52d和E59d時，TRAF6和MyD88相對表達(dá)量最高;而在出生后到成年（3個月）期，各因子的表達(dá)量顯著降低，且出生后的不同時期，同一因子間的表達(dá)差異不顯著。同時，利用蛋白免疫印跡WesternBlotting技術(shù)在蛋白質(zhì)水平進(jìn)一步對上述因子的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證。上述結(jié)果表明，豚鼠肺臟在發(fā)育過程中，隨著上皮細(xì)胞的增殖和分化，肺臟在形態(tài)學(xué)和功能上趨于成熟。TLRs在出生前的增高現(xiàn)象在分子水平提示豚鼠肺臟出生前的形態(tài)功能成熟性，