高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成能力的影響.pdf

1、鮑曼不動桿菌（Acinetobacterbaumannii）是一種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界及醫(yī)院環(huán)境中，屬于條件致病菌，能引起一系列院內(nèi)感染，如獲得性肺炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥、繼發(fā)性腦膜炎、創(chuàng)傷感染等，嚴重威脅著患者的生命。近年來，隨著廣譜抗生素，尤其是耐碳青霉烯類的廣泛應(yīng)用以及醫(yī)療置入物的增多，鮑曼不動桿菌引起的嚴重院內(nèi)感染日趨嚴重，其感染的發(fā)病率和病死率也迅速上升。長期以來，人們對細菌的認識主要通過浮游的個體菌，然而近

2、年來的研究表明，細菌主要是通過生物膜的形式附著于物體表面維系其生存。同時，國外有研究證實，高濃度葡萄糖能明顯誘導(dǎo)細菌生物膜的形成。而由生物膜引起的感染卻是鮑曼不動桿菌致病的重要原因。因此，研究高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成的影響，將為防治其所致的感染提供有效的思路和方法。
　　本實驗收集某院鮑曼不動桿菌30株，用瓊脂稀釋法測定其耐藥性；用結(jié)晶紫染色法半定量測定其形成生物膜的能力，從中篩選出能形成生物膜的鮑曼不動桿菌，用不同濃

3、度葡萄糖對其進行培養(yǎng)，同樣采用結(jié)晶紫染色法進行測定，分析高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成的影響；采用激光掃描共聚焦顯微鏡對其中三株形成生物膜能力為強陽性的鮑曼不動桿菌進行動態(tài)監(jiān)測，進一步觀察在不同濃度葡萄糖培養(yǎng)條件和不同時間點下，高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成的影響。
　　一、鮑曼不動桿菌生物膜形成能力與其耐藥率關(guān)系的研究
　　采用結(jié)晶紫染色法對30株鮑曼不動桿菌進行定量分析。以不同濃度葡萄糖培養(yǎng)此30株鮑曼不動桿

4、菌作為實驗組，同時設(shè)不加糖條件下培養(yǎng)的鮑曼不動桿菌為對照組。將陰性對照的平均A570值加標(biāo)準(zhǔn)差定義為Ac,用待測菌株3個復(fù)孔（A570）的平均值與Ac比較,則菌株生物膜形成能力可以分為四類:陰性(-):無生物膜形成,A≤Ac;弱陽性(+):Ac4×Ac。采用以上標(biāo)準(zhǔn)得出結(jié)果顯示，該30株鮑曼不動桿菌臨床分離株均具有生物被膜形成能力且形成試驗均為強陽性。

5、>　　利用瓊脂倍比稀釋法測定氨曲南注射液、頭孢他啶注射液、哌拉西林、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、頭孢哌酮/舒巴坦、美羅培南、阿米卡星對鮑曼不動桿菌的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果顯示30株鮑曼不動桿菌臨床分離株對頭孢他啶、哌拉西林、阿米卡星的耐藥率均為96.6％（29/30），頭孢哌酮/舒巴坦、美羅培南的耐藥率均為86.7%(26/30)，哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐藥率分別為93.9%（28/30）、63.6%(19/30)。因此

6、，該30株鮑曼不動桿菌均具有較強的生物膜形成能力，且具有多重耐藥性。
　　二、高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成能力的影響
　　首先對30株鮑曼不動桿菌的標(biāo)本分布進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)多數(shù)以老年患者居多（36.7%），標(biāo)本類型主要為痰標(biāo)本（76.7%），患者所在科室主要集中在神經(jīng)外科（36.7%）、骨科（13.3%）、ICU（13.3%）和SICU（10%）等。
　　對上述30株生物膜形成能力為強陽性的鮑曼不動桿菌用不同濃度

7、葡萄糖（5、7、11.1、16.7、20、30mmol/l）培養(yǎng)，同樣采用結(jié)晶紫染色法對其形成的生物膜進行半定量檢測。半定量實驗數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計分析顯示，隨著葡萄糖濃度的增加，其吸光度呈上升趨勢，在11.1mmol/L以后形成的生物膜要比不加糖條件下形成的生物膜多（p<0.05），并且在葡萄糖濃度為11.1mmol/l之后各組吸光度值無差異（p>0.05），呈平緩趨勢。這說明高濃度葡萄糖能明顯誘導(dǎo)鮑曼不動桿菌生物膜的形成。
　　三、激光

8、共聚焦顯微鏡觀察高濃度葡萄糖對鮑曼不動桿菌生物膜形成的影響
　　從30株鮑曼不動桿菌中挑選出生物膜形成能力最強的三株鮑曼不動桿菌為研究對象，采用不同濃度葡萄糖培養(yǎng)，在蓋玻片上形成生物膜，分別于接種后12、24、36、48、60和72h取出玻片，采用免疫熒光技術(shù)標(biāo)記細菌和多糖，激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察鮑曼不動桿菌生物膜形成的動態(tài)過程，并測定其生物膜的厚度。
　　用CLSM觀察顯示，當(dāng)葡萄糖濃度≥11.1mmol/L