鮑曼不動(dòng)桿菌體外聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)及生物膜形成能力與耐藥性相關(guān)性研究.pdf

1、目的:通過(guò)分析來(lái)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染患者標(biāo)本的鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥情況以及聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物，篩選出優(yōu)化的治療方案，為廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染制定有效治療方法，為臨床合理應(yīng)用抗菌藥物提供有效依據(jù)。通過(guò)結(jié)晶紫染色法和藥敏試驗(yàn)分析鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力與其耐藥性的關(guān)系，探討生物膜在鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制中可能發(fā)揮的作用，參考聯(lián)合藥物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，確定單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜合成的抑制作用，以期通過(guò)選擇有效的單獨(dú)或聯(lián)合

2、用藥方案抑制鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜的合成，降低鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性，提高抗菌藥物的敏感性。
　　方法:收集2013-2014年我院住院患者的標(biāo)本，整理臨床資料，對(duì)收集的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和分離，篩選出50株臨床資料完善的鮑曼不動(dòng)桿菌，采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的瓊脂二倍稀釋法測(cè)定抗菌藥物的MIC值，根據(jù)《中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專(zhuān)家共識(shí)》和《中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專(zhuān)家共識(shí)解讀》選擇常用藥物，并根據(jù)CLSI

3、2012年頒布的抗菌藥物臨界濃度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行耐藥性分析。在耐藥性分析的基礎(chǔ)上，篩選出40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分離株，根據(jù)美國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌診治指南（2015年）、《中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專(zhuān)家共識(shí)》、《中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專(zhuān)家共識(shí)解讀》分別測(cè)定了7種抗菌藥物和5種聯(lián)合用藥方案的藥敏試驗(yàn)，比較了聯(lián)合用藥與單獨(dú)用藥的抑菌效果。按Stepanovic等的方法稍加改良，采用96孔板結(jié)晶紫染色法檢測(cè)檢測(cè)了40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分離

4、株生物膜形成能力。在耐藥性分析的基礎(chǔ)上，對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性與其生物膜形成能力的關(guān)系進(jìn)行了分析，同時(shí)研究不同抗菌藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜合成的抑制作用。
　　結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)包括兩部分，第一部分結(jié)果顯示:2013-2014年共分離出臨床資料完善的50株鮑曼不動(dòng)桿菌，主要分布在重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)、神經(jīng)外科和普外科。50株鮑曼不動(dòng)桿菌根據(jù)藥敏值被分成，非多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌（non-multidrug-resistant Ac

5、inetobacter baumannii，non-MDRAB）10株、多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(multidrug-resistant Acinetobacter baumannii，MDRAB)40株，其中40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中包括廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(extensively-drugresistant Acinetobacter baumannii，XDRAB)10株。這些鮑曼不動(dòng)桿菌分離株對(duì)米諾環(huán)素、替加環(huán)素耐藥率最低，均為0

6、，多粘菌素2年的耐藥率分別為20％和16％。其他抗菌藥物耐藥率均在50％以上。左氧氟沙星的耐藥率為56％和64％。2014年頭孢哌酮/舒巴坦(2∶1)和2013年亞胺培南的耐藥率均為96％，為各種抗菌藥物耐藥率之最高值。聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物的結(jié)果顯示:在替加環(huán)素+頭孢哌酮舒巴坦組中，協(xié)同作用占7.5％，相加作用占30％，無(wú)關(guān)作用占62.5％;多粘菌素+米諾環(huán)素組中，協(xié)同作用占22.5％，相加作用占27.5％，無(wú)關(guān)作用占50％;多粘菌素+亞胺

7、培南組中，協(xié)同作用占55％，相加作用22.50％，無(wú)關(guān)作用占22.5％;多粘菌素+多尼培南組中，協(xié)同作用占12.5％，相加作用占67.5％，無(wú)關(guān)作用占20％;替加環(huán)素+亞胺培南組中，協(xié)同作用占32.5％，相加作用占40％，無(wú)關(guān)作用占27.5％。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)拮抗現(xiàn)象。30株（除去廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌）多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的單用和聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物的結(jié)果顯示:聯(lián)合用藥組的MIC值與相應(yīng)單用藥物MIC值相比均有下降，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其差異非常顯

8、著（P值均小于0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均小于0.01）。對(duì)10株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的單用和聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物的結(jié)果顯示:除了替加環(huán)素+頭孢哌酮/舒巴坦組中的替加環(huán)素的MIC值與單用替加環(huán)素的MIC值相比，P值大于0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而其它聯(lián)合用藥組合的MIC值均比相應(yīng)的單獨(dú)用藥MIC值有所下降，其差異非常顯著(P值均小于0.01)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分離株中，95％的

9、菌株具有生物膜形成能力，其中形成能力中等和強(qiáng)陽(yáng)性的菌株分別為32.5％和45％，兩者之和占總樣本的77.5％。對(duì)阿米卡星和左氧氟沙星耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌株數(shù)隨著生物膜形成能力的增強(qiáng)而增加，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（阿米卡星為P＜0.01，左氧氟沙星為P＜0.05）。多粘菌素，替加環(huán)素，亞胺培南單獨(dú)或聯(lián)合作用均具有抑制鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜合成的作用。在單一藥物的試驗(yàn)中，多粘菌素的抑制作用最強(qiáng)，其生物膜下降率為53.83％。亞胺培南的抑制作用最弱，其

10、生物膜下降率僅為25.46％。但是在聯(lián)合用藥中，無(wú)論是多粘菌素+亞胺培南還是替加環(huán)素+亞胺培南對(duì)生物膜合成抑制作用都比單用多粘菌素或替加環(huán)素大，分別為62.12％和62.88％，說(shuō)明亞胺培南與多粘菌素或替加環(huán)素合用對(duì)于鮑曼不動(dòng)桿菌的生物膜合成的抑制作用比單獨(dú)用藥更加明顯。
　　結(jié)論:通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們得出以下結(jié)論:
　　1.我院2013-2014年檢出的50株鮑曼不動(dòng)桿菌體外藥敏結(jié)果提示，替加環(huán)素、米諾環(huán)素均100％敏感，多粘菌素

11、國(guó)內(nèi)雖未上市，臨床分離菌株已經(jīng)出現(xiàn)耐藥，但敏感率為82％，處于較高水平;阿米卡星、亞胺培南耐藥率較高，分別達(dá)到56％和90％，與國(guó)內(nèi)資料一致;頭孢哌酮/舒巴坦(1∶1)在對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的治療上優(yōu)于頭孢哌酮/舒巴坦(2∶1)，但整體耐藥性也較高。
　　2.參考國(guó)內(nèi)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治專(zhuān)家共識(shí)及解讀內(nèi)容與美國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌診治指南（2015年）的相關(guān)推薦方案，我們采用5組聯(lián)合用藥方案:替加環(huán)素+頭孢哌酮/舒巴坦;多粘菌素+米諾環(huán)素;多粘

12、菌素+亞胺培南;多粘菌素+多尼培南;替加環(huán)素+亞胺培南。其中，多粘菌素+亞胺培南組，替加環(huán)素+亞胺培南組與其他聯(lián)合用藥組相比FIC值更低，表現(xiàn)出更好的協(xié)同作用。
　　3.對(duì)其中的40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分離株進(jìn)行的生物膜形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，大部分MDR菌株(95％)可以形成生物膜，且生物膜形成能力與部分抗菌藥物（包括阿米卡星，左氧氟沙星）耐藥性之間存在較明顯的正相關(guān)性。
　　4.生物膜抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):單獨(dú)應(yīng)用替加環(huán)素