P5CS基因的克隆及其在露地菊上的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究以露地菊（Dendranthema×gandiflorum）品系‘東林4號(hào)’、‘東林6號(hào)’、‘東林9號(hào)’和‘東林13號(hào)’為試驗(yàn)材料，研究了不同品系在滲透脅迫下的生理活性的改變。同時(shí)，建立了‘東林4號(hào)’、‘東林6號(hào)’、‘東林9號(hào)’葉片外植體再生體系;從擬南芥中克隆了P5CS基因，應(yīng)用Gateway克隆技術(shù)構(gòu)建了植物表達(dá)載體，并構(gòu)建了P5CS基因在露地菊上的遺傳轉(zhuǎn)化體系，主要結(jié)果如下：
　　1、露地菊抗?jié)B透品系的篩選
　　

2、在鹽堿脅迫條件下，‘東林4號(hào)’、‘東林9號(hào)’和‘東林13號(hào)’三個(gè)品系的耐鹽性較強(qiáng)，‘東林6號(hào)’的耐鹽性較差，無法適應(yīng)高鹽脅迫條件。
　　在低溫脅迫條件下，隨著溫度的降低，‘東林4號(hào)’、‘東林6號(hào)’、‘東林9號(hào)’、‘東林13號(hào)’4個(gè)品系都受到不同程度的低溫傷害，‘東林4號(hào)’受低溫影響最小。
　　2、P5CS基因的克隆及植物表達(dá)載體的構(gòu)建
　　通過RT-PCR方法從擬南芥中克隆了P5CS的cDNA全長基因。利用Gatewa

3、y克隆技術(shù)構(gòu)建了P5CS基因的植物表達(dá)載體。
　　3、露地菊P5CS基因的遺傳轉(zhuǎn)化
　　建立‘東林4號(hào)’、‘東林6號(hào)’、‘東林9號(hào)’葉片外植體再生體系，發(fā)現(xiàn)不同基因型葉片外植體的分化率差異顯著?！畺|林9號(hào)’的葉片外植體分化率最高?！畺|林4號(hào)’最適分化培養(yǎng)基為:MS+3mg/LBA+0.1mg/L2，4-D，葉片分化率為10％;‘東林6號(hào)’最適分化培養(yǎng)基為:MS+2mg/L BA+1mg/LNAA，葉片分化率為82％;‘東林9

4、號(hào)’最適分化培養(yǎng)基為:MS+0.5mg/LBA+1.5mg/LNAA，該品系植株上層幼嫩葉片分化率為95％，中下層葉片分化率均小于50％;
　　潮霉素對(duì)以葉片為外植體的分化起到很強(qiáng)的抑制作用，在潮霉素含量為5mg/L的培養(yǎng)基中葉片即可失去分化能力。‘東林9號(hào)’品系組培再生芽在含有30mg/L潮霉素的培養(yǎng)基中全部死亡。
　　通過農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)，初步建立了P5CS基因轉(zhuǎn)入露地菊的遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)過PCR鑒定得到了一個(gè)陽