簡介：I碩士學(xué)位論文論文題目LUMICAN對胃腺癌腺細(xì)胞生物學(xué)特性影響及臨床意義研究生姓名孔凡志指導(dǎo)教師姓名張學(xué)利專業(yè)名稱外科學(xué)（普外科）研究方向胃腸腫瘤論文提交日期2013年4月LUMICAN對胃腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響及臨床意義中文摘要ILUMICAN對胃腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響及臨床意義中文摘要腫瘤微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個階段中都起著至關(guān)重要的作用。其中細(xì)胞外基質(zhì)蛋白是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，在腫瘤中常常發(fā)現(xiàn)基質(zhì)蛋白有異常表達(dá)，其有助于腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移，近年來研究顯示，LUMICAN的表達(dá)與許多惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移相關(guān)，但其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的確切作用還不明確。因此我們探討了SLRP家族成員LUMICAN在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，從而進一步來理解LUMICAN與人類腫瘤的關(guān)系。應(yīng)用RTPCR、熒光定量PCR、免疫印跡及免疫組織化學(xué)技術(shù)，在MRNA及蛋白水平檢測了LUMICAN在胃腺癌組織中的表達(dá)情況；應(yīng)用慢病毒載體系統(tǒng)建立了LUMICAN過表達(dá)和特異性干擾細(xì)胞株，利用CCK8實驗，平板克隆及裸鼠皮下成瘤實驗，分析了過表達(dá)或干擾LUMICAN表達(dá)對胃腺癌細(xì)胞生長的影響；TRANSWELL及MATRIGEL膠穿實驗，分析了其對胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測了LUMICAN表達(dá)上調(diào)或下調(diào)時胃腺癌細(xì)胞失巢凋亡率的改變，及LUMICAN上調(diào)時胃腺癌細(xì)胞周期的改變；免疫印跡技術(shù)和細(xì)胞免疫熒光檢測了SMAD2、SAMD3及SAMD4的表達(dá)和活化。同時我們還構(gòu)建了LUMCIAN重組蛋白PQE30HLUMICAN（分子量約40KDA）原核表達(dá)載體系統(tǒng)及V152HLUMICAN分子量約55KDA真核表達(dá)載體系統(tǒng)，利用CCK8實驗，分析了兩種重組蛋白對胃腺癌細(xì)胞生長的影響；通過TRANSWELL實驗，分析了兩種重組蛋白對胃腺癌細(xì)胞遷移能力的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測了V152HLUMICAN重組蛋白對胃腺癌細(xì)胞失巢凋亡的影響；軟瓊脂克隆形成實驗觀察了其對胃腺癌細(xì)胞非錨定生長的影響；裸鼠皮下成瘤實驗觀察了其對胃腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長的影響。研究結(jié)果表明胃腺癌組織中LUMICANMRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁正常粘膜組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）。胃腺癌組織中LUMCIAN主要以其分子量為55KDA大小的糖蛋白形式存在，40KDA大小的核心蛋白（CEPROTEIN）也有少量表達(dá)。免疫組化結(jié)果顯示LUMICAN蛋白在胃腺癌組織的表達(dá)率顯著高于癌旁正常粘膜（9167比75，P001），其表達(dá)水平與胃腺癌患者的性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位、LAREN分型、是否為印戒細(xì)胞癌、脈管侵犯、癌栓無明顯相關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)

簡介：隸劫大粵博士學(xué)位論文脂肪酸合酶FASN表達(dá)與結(jié)直腸癌I臨床病理相關(guān)性研究及其對腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響本研究獲國家自然科學(xué)基金81150028、江蘇省自然科學(xué)基金B(yǎng)K2012749、南京市科技局科技發(fā)展計劃項目201001102以及南京市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科技發(fā)展項目YKK09047資助。東南大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得東南大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名石詒日期20150120東南大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明東南大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。除在保密期內(nèi)的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布包括以電子信息形式刊登論文的全部內(nèi)容或中、英文摘要等部分內(nèi)容。論文的公布包括以電子信息形式刊登授權(quán)東南大學(xué)研究生院辦理。研究生簽名東鐫導(dǎo)師簽名日期20150120刪

簡介：目的建立從動員后家兔外周血分離、擴增外周血間充質(zhì)干細(xì)胞PBMSCS的方法，并就家兔PBMSCS表型特征、集落形成率及體外多向分化能力等生物學(xué)特性進行研究評價，以確證家兔存在PBMSCS，并為外周血作為間充質(zhì)干細(xì)胞的新來源提供有價值的實驗依據(jù)。方法①家兔PBMSCS的分離及表型鑒定取成年新西蘭大白兔，按照30ΜGKG給藥劑量皮下注射GCSF動員6天，取兔外周血20ML，采用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)兔PBMSCS取培養(yǎng)的P2代細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)CD29、CD14、免疫細(xì)胞化學(xué)染色CD90、CD105、CD44、CD34、CD45對分離培養(yǎng)的兔PBMSCS進行表型鑒定，實驗同時采用聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR對維持干細(xì)胞多能性轉(zhuǎn)錄因子OCT4的表達(dá)進行檢測。②家兔PBMSCS生長曲線、細(xì)胞倍增時間DT及集落形成率CFE分析取P2代細(xì)胞，以5103孔接種于24孔板，37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)，從接種第2D起每日消化3孔細(xì)胞，采用細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)，連續(xù)7D，繪制生長曲線，并計算細(xì)胞倍增時間。兔PBMSCS集落形成率的檢測分別取未動員及動員后的兔外周血單個核細(xì)胞PBMNCS，按5105CM2接種于6孔板中，用含15％FBS、100UML青霉素和100ΜGML鏈霉素的ΑMEM培養(yǎng)基，置37℃、5％CO2飽和濕度條件下進行培養(yǎng)，14D后4％多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色，置解剖鏡下觀察，對細(xì)胞數(shù)目超過50個的集落進行計數(shù)。集落形成率集落形成單位數(shù)接種細(xì)胞數(shù)106。③家兔PBMSCS向中胚層細(xì)胞分化能力鑒定包括成骨、成軟骨和成脂分化能力。成骨誘導(dǎo)分化鑒定取P2代細(xì)胞，以30103CM2密度接種于預(yù)置蓋玻片的6孔板內(nèi)，待細(xì)胞生長匯合度達(dá)50％～60％時，棄去原培養(yǎng)基，誘導(dǎo)組細(xì)胞換成2ML孔誘導(dǎo)培養(yǎng)液（含10％FBS、雙抗、谷氨酰胺、抗壞血酸、Β甘油磷酸鈉、地塞米松）。置37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)，每3D換液1次，倒置顯微鏡觀察形態(tài)變化，于誘導(dǎo)第21D進行茜素紅染色鑒定成骨誘導(dǎo)分化情況。成軟骨分化能力鑒定取P2代細(xì)胞，按5105ML細(xì)胞密度加入軟骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基（含VITC、ITS添加物、地塞米松、丙酮酸鈉、脯氨酸、TGFΒ3）重懸細(xì)胞，吸取500ΜL細(xì)胞懸液（25105個細(xì)胞）轉(zhuǎn)入15ML離心管中，150G離心5MIN，離心后小心地將離心管蓋擰松，置37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)。每3D換液一次，觀察細(xì)胞團塊變化，并于誘導(dǎo)21D后進行培養(yǎng)細(xì)胞團塊的石蠟包埋、切片，脫蠟后進行阿利新藍(lán)染色。成脂細(xì)胞分化能力鑒定取P2代細(xì)胞，以2104CM2密度接種于預(yù)置蓋玻片的6孔板中，待細(xì)胞長滿孔底時（培養(yǎng)2D左右），棄去原培養(yǎng)基，誘導(dǎo)組換成2ML孔誘導(dǎo)培養(yǎng)液A（含10％FBS、雙抗、谷氨酰胺、胰島素、IBMX、吲哚美辛、地塞米松）培養(yǎng)3D，再換成維持培養(yǎng)液B（含10％FBS、雙抗、谷氨酰胺、胰島素）培養(yǎng)1D，構(gòu)成一個培養(yǎng)循環(huán)，同法培養(yǎng)三個循環(huán)后，用維持培養(yǎng)基B繼續(xù)培養(yǎng)7天，于誘導(dǎo)結(jié)束后取出標(biāo)本進行油紅染色。④家兔PBMSCS的跨胚層分化能力鑒定包括神經(jīng)元樣細(xì)胞、肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)鑒定。含10％FBS、1ΜMOLL全反式維甲酸ATRA、2MMOLLLGLU的ΑMEM培養(yǎng)基用于神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化采用添加表皮生長因子EGF、堿性成纖維生長因子BFGF預(yù)誘導(dǎo)2D后，再采用添加HGF、BFGF和尼克酰胺培養(yǎng)基誘導(dǎo)9D，最后用添加抑瘤素M、地塞米松和ITS液培養(yǎng)基誘導(dǎo)10D的分步誘導(dǎo)法誘導(dǎo)肝樣細(xì)胞分化。采用免疫組化染色檢測神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)后的神經(jīng)元核蛋白NEUN、神經(jīng)元特異性烯醇化酶NSE的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法對肝樣細(xì)胞分化后的CK18的表達(dá)進行檢測分析。結(jié)果①家兔PBMSCS培養(yǎng)形態(tài)原代培養(yǎng)24H后，可見較多短梭形及多角形貼壁細(xì)胞，3～4D后出現(xiàn)集落樣生長，接種9～10D融合度達(dá)80％以上傳代培養(yǎng)的PBMSCS形態(tài)均一、呈長梭形漩渦狀生長。②家兔PBMSCS表型特征FCM分析結(jié)果顯示PBMSCS表達(dá)CD29，不表達(dá)CD14免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，PBMSCS表達(dá)CD105、CD44、CD90及波形蛋白，不表達(dá)CD34和CD45。RTPCR結(jié)果表明，PBMSCS表達(dá)多潛能干細(xì)胞特定轉(zhuǎn)錄因子OCT4。③家兔PBMSCS生長曲線、細(xì)胞倍增時間及集落形成率生長曲線顯示PBMSCS增殖能力旺盛，培養(yǎng)后2D進入對數(shù)生長期，細(xì)胞倍增時間為374H經(jīng)CFUF集落形成率的實驗結(jié)果表明，動員后的家兔PBMSCS存在頻率為每百萬個外周血單個核細(xì)胞PBMNCS中有28～108個PBMSCS，而未動員組僅為0～3個106。④家兔PBMSCS的成骨、成軟骨和成脂分化能力PBMSCS經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)21D后，茜素紅染色顯示有明顯的鈣結(jié)節(jié)形成經(jīng)軟骨培養(yǎng)體系誘導(dǎo)后21D的細(xì)胞團切片，阿利新藍(lán)染色呈強陽性反應(yīng)經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)21D后，油紅染色顯示誘導(dǎo)細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量脂滴。⑤家兔PBMSCS的跨胚層分化（神經(jīng)元樣細(xì)胞、肝樣細(xì)胞）能力PBMSCS經(jīng)神經(jīng)元培養(yǎng)體系誘導(dǎo)后，出現(xiàn)NSE、NEUN表達(dá)經(jīng)肝樣細(xì)胞培養(yǎng)體系誘導(dǎo)后可表達(dá)CK18。未誘導(dǎo)組均不表達(dá)上述分子。結(jié)論成功從動員后家兔外周血中分離培養(yǎng)出高增殖能力的MSCS，即PBMSCS。在適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，家兔PBMSCS可向中胚層細(xì)胞（成骨、成軟骨、成脂細(xì)胞）分化同時，本實驗還證實了分離培養(yǎng)的家兔PBMSCS具有向內(nèi)胚層（肝樣細(xì)胞）和外胚層（神經(jīng)元樣細(xì)胞）細(xì)胞跨系分化的潛力，提示外周血可以做為MSCS的新來源，PBMSCS有望成為治療各種慢性組織損傷性疾病研究的新的供體細(xì)胞。

簡介：中圖分類號R656單位代碼10660UDC6163學(xué)號10660S120426學(xué)科專業(yè)代碼100210密級公開貴陽醫(yī)學(xué)院2015屆碩士學(xué)位論文（科學(xué)學(xué)位）缺氧誘導(dǎo)因子1?。℉IF1?。┗虺聊髮W480人結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響EFFECTSOFSILENCINGHIF1ΑONTHEBIONOMICSOFHUMANCOLONCANCERCELLSSW480研究生王強導(dǎo)師郝朗松教授孫誠誼教授年級2012級專業(yè)外科學(xué)（普外）二〇一五年五月貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。除與外單位合作項目將予以明確方式規(guī)定外，本研究已發(fā)表與未發(fā)表成果的知識產(chǎn)權(quán)均歸屬貴陽醫(yī)學(xué)院。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名（手寫）___________導(dǎo)師簽名（手寫）_______________________年____月____日____________年____月____日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)貴陽醫(yī)學(xué)院可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于（請在以下相應(yīng)方框內(nèi)打“√”）1、保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密□。作者簽名（手寫）___________導(dǎo)師簽名（手寫）_______________________年____月____日____________年____月____日

簡介：▲乍睡犬碩士學(xué)位論文MICRORNA199A慢病毒載體的構(gòu)建及其對激素非依賴前列腺癌細(xì)胞腫瘤生物學(xué)特性的作用研究CONSTRUCTIONOFMICRORNA199ALENTIVIRALVECTORANDITSEFFECTSONTHEBIOLOGICALFUNCTIONSOFANDROGENINDEPENDENTPROSTATECANCERCELLS研究生姓名張東旭專業(yè)名稱研究方向?qū)熜彰笇?dǎo)小組外科學(xué)泌尿外科泌尿系腫瘤及腔內(nèi)泌尿外科學(xué)徐丹楓教授崔心剛副教授洪誼助理研究員培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學(xué)附屬第二附屬醫(yī)院論文提交日期2013年5月21號獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名掀悉、旭簽字日期加L弓年F月1日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文儲張孤森他鋤鮐觚簽字日期加I’年月1日簽字日期年月日

簡介：研究生導(dǎo)師及課題指導(dǎo)小組成員介紹研究生導(dǎo)師左文述1983年8月山東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)系畢業(yè)分配到山東省腫瘤防治研究院工作至今。歷任外科主治醫(yī)師、普外科副主任醫(yī)師、山東省乳腺病防治中心山東省乳腺病診斷治療技術(shù)研究推廣中心研究員主任醫(yī)師?，F(xiàn)任山東省腫瘤醫(yī)院外科二病區(qū)山東省乳腺病防治中心主任，中華腫瘤防治雜志社副社長、常務(wù)副主編、編輯部主任。學(xué)術(shù)專長或研究方向從事腫瘤外科，主要研究方向為乳腺癌的診斷與治療。完成課題10余項，為首或為主獲教育部科技進步二等獎1項，安徽省科技進步二等獎1項，山東省科技進步一等和三等獎3項，山東省教育委員會科學(xué)技術(shù)進步一等獎1項，山東省醫(yī)學(xué)科技進步三等獎2項，山東省開發(fā)利用檔案信息資源成果二等獎1項，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院科技成果二等獎1項及三等獎2項。主編及參編專著20余部，其中現(xiàn)代乳腺腫瘤學(xué)第一、第二版及現(xiàn)代肛腸腫瘤外科學(xué)得到了業(yè)界廣泛的認(rèn)可，在專業(yè)刊物上發(fā)表學(xué)術(shù)論文130余篇，在報刊發(fā)表科普文章50余篇。社會兼職CSCO執(zhí)行委員；中國抗癌協(xié)會乳腺癌專業(yè)委員會委員；中國老年學(xué)學(xué)會老年腫瘤專業(yè)委員會執(zhí)行委員會委員；中國癌癥基金會全國腫瘤學(xué)期刊研究會常務(wù)委員；中國期刊編輯學(xué)會腫瘤專業(yè)委員會常務(wù)委員；山東省抗癌協(xié)會普外專業(yè)委員會乳腺甲狀腺學(xué)組副組長；山東抗癌協(xié)會第二屆普外腫瘤分會常務(wù)委員；中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會第三屆編輯專業(yè)委員會常務(wù)委員；中國抗癌協(xié)會腫瘤信息專業(yè)委員會委員；山東省科技期刊協(xié)會第一屆理事會理事；山東省抗癌協(xié)會理事。指導(dǎo)小組成員宋現(xiàn)讓，男，1965年10月生，醫(yī)學(xué)博士，研究員，主要從事腫瘤基礎(chǔ)研究與檢驗診斷于志勇，男，1965年12月生，醫(yī)學(xué)博士，研究員，主要研究領(lǐng)域乳腺腫瘤劉巖松，男，1971年05月生，副主任醫(yī)師，主要研究領(lǐng)域乳腺腫瘤魏玲，女，醫(yī)學(xué)碩士，1972年3月生，副研究員，研究方向；腫瘤細(xì)胞的分子生物學(xué)王興武，男，醫(yī)學(xué)碩士，1973年2月生，主管技師，主要從事腫瘤細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的研究工作目錄中文摘要II英文摘要V主要符號表Ⅶ前言1日U舌L材料與方法41實驗材料42實驗方法7結(jié)果14討論26參考文獻34綜述一39附錄52致謝53

簡介：點擊查看更多基于建立臨床用細(xì)胞庫的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：沉默GPC3基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響3LLENCMGGLYPLCAN3RENEINDUCES1910LOKLCAL19ELAAVLOR一●●1●●11●1●111●L一1一CHARGEDINHUMANHEPATOCELLULARCARCINOMACELLS導(dǎo)師姜墨絲論文課題起止時間2Q蘭生墨魍二至Q壘生三月中國醫(yī)科大學(xué)遼寧2014年3月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要4二、英文縮略語7三、論文沉默GPC3基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響前言8耳U舌石材料與方法9實驗結(jié)果13討論17結(jié)論19四、本研究創(chuàng)新性的自我評價結(jié)論20五、參考文獻2L六、附錄綜述25在學(xué)期間科研成績34致謝35個人簡介36

簡介：分類號UDCR73535重慶醫(yī)科大學(xué)密級博士學(xué)位論文論文題目作者姓名RNA干擾SLUG基因?qū)Y(jié)腸癌HCTLL6細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機制研究錢江指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱傅仲學(xué)教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科重慶市渝中區(qū)袁家崗醫(yī)學(xué)院路1號400016申請學(xué)位級別博士學(xué)科、專業(yè)名稱外科學(xué)論文答辯年月2013年5月2013年5月目錄英漢縮略語名詞對照1中文摘要。3英文摘要6RNA干擾SLUG基因?qū)Y(jié)腸癌HCTLL6細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機制研究1L前言1L事嗜文獻14第一部分人SLUG基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義151材料與設(shè)備152實驗方法和步驟173糾I果184討論205小結(jié)。226結(jié)論22參考文獻23第二部分SLUG基因RNAI慢病毒載體的制備、包裝與病毒滴度測定251材料與設(shè)備252實驗方法和步驟303結(jié)果574對論645小結(jié)。686結(jié)論。68參考文獻69第三部分慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾沉默SLUG基因?qū)Y(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞生物學(xué)行為的影響731材料與設(shè)備732實驗方法和步驟。743結(jié)果78

簡介：碩士學(xué)位論文論文題目C3AR1基因在白血病細(xì)胞中的生物學(xué)作用的研究研究生姓名李爭指導(dǎo)教師姓名胡紹燕專業(yè)名稱兒科學(xué)（血液?。┭芯糠较蛐喊籽〉陌l(fā)病機制及靶向治療論文提交日期2013年3月C3AR1基因在白血病細(xì)胞中的生物學(xué)作用的研究中文摘要IC3AR1基因在白血病細(xì)胞中的生物學(xué)作用的研究中文摘要第一部分第一部分C3AR1基因慢病毒載體的構(gòu)建基因慢病毒載體的構(gòu)建目的目的構(gòu)建C3AR1（COMPLEMENTCOMPONENT3ARECEPT1）基因的慢病毒載體，為研究該基因在白血病細(xì)胞中的功能奠定基礎(chǔ)。方法方法1利用基因克隆技術(shù)，擴增出人補體C3A受體1C3AR1基因，插入PMD19質(zhì)粒中，進行測序分析。2基因重組構(gòu)建慢病毒載體質(zhì)粒C3AR1VENUS，采用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染人腎上皮細(xì)胞系293T，包裝慢病毒顆粒。結(jié)果結(jié)果所獲C3AR1基因經(jīng)測序與GENBANK比對序列一致。慢病毒載體質(zhì)粒C3AR1VENUS經(jīng)BAMHI酶切鑒定片段大小正確。轉(zhuǎn)染72H后在熒光顯微鏡下觀察，大于90的293T細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白（GREENFLUESCENTPROTEIN，GFP）。結(jié)論結(jié)論我們成功構(gòu)建帶有C3AR1基因的慢病毒載體，為研究C3AR1基因在白血病細(xì)胞中的功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞C3AR1基因；慢病毒載體；293T細(xì)胞；HL60第二部分第二部分C3AR1基因在基因在白血病白血病細(xì)胞中細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)及其穩(wěn)定表達(dá)及其生物學(xué)功能研究生物學(xué)功能研究目的目的通過慢病毒載體介導(dǎo)C3AR1在白血病細(xì)胞株HL60和K562中穩(wěn)定高表達(dá)，觀察C3AR1基因及C3AC3AR軸對HL60和K562細(xì)胞增殖、分化、凋亡、遷移及細(xì)胞周期的影響，初步探討C3AR1基因在白血病細(xì)胞中的生物學(xué)功能。方法方法1向HL60K562細(xì)胞中加入富含慢病毒顆粒的上清液，共培養(yǎng)72H，流式細(xì)胞術(shù)（FLOWCYTOMETRY，F(xiàn)CM）檢測GFP表達(dá)情況，評估感染效率；反轉(zhuǎn)錄PCR（REVERSETRANIONPCR，RTPCR）、FCM檢測C3AR1在細(xì)胞中的表達(dá)。2將實驗細(xì)胞分成三組未轉(zhuǎn)染組，空載體VENUS轉(zhuǎn)染組以及C3AR1轉(zhuǎn)染組，使用CCK8試劑盒測定細(xì)胞活力，繪制細(xì)胞生長曲線，對比細(xì)胞增殖情況，觀察C3AR1對HL60

簡介：太空中的復(fù)雜環(huán)境對宇航員的生理健康有著重要影響，重力消失導(dǎo)致宇航員出現(xiàn)骨質(zhì)流失、肌肉萎縮、免疫功能抑制等一系列生理適應(yīng)性改變和或病理變化。由于空間實驗條件的限制，人們在地基通過各種裝置模擬空間微重力效應(yīng)，研究其對細(xì)胞的生物學(xué)行為影響。但是由于空間微重力模擬原理的復(fù)雜性導(dǎo)致其在實際操作中難以實現(xiàn)真正的微重力，以及不同實驗裝置、實驗材料和實驗方法等帶來的問題，使得地基模擬微重力效應(yīng)研究的結(jié)果離散，難以得到規(guī)律性的或一致的定量結(jié)果。針對空間飛行骨流失這一重大生理變化，我們通過改變細(xì)胞基底取向，研究了靜態(tài)力學(xué)微擾（與重力相關(guān)）對前成骨細(xì)胞MC3T3生物學(xué)行為的影響。研究發(fā)現(xiàn)，MC3T3在靜態(tài)力學(xué)微擾下保持了正常的細(xì)胞形態(tài)，增殖、細(xì)胞周期和分化等生理功能也沒有受到影響。組成細(xì)胞骨架的不同種類蛋白在不同力學(xué)微擾下的表達(dá)強度發(fā)生了不同的變化微絲蛋白（ACTIN）和中間絲蛋白（VIMENTIN）分別在倒置和側(cè)置基底上有顯著性上調(diào)，同時細(xì)胞的粘著斑數(shù)量也發(fā)生了一定的變化。我們的研究結(jié)果說明細(xì)胞在感受靜態(tài)力學(xué)微擾時，通過對自身細(xì)胞骨架的調(diào)控，維持了細(xì)胞的基本形態(tài)和生理功能。針對空間飛行中的免疫抑制，我們利用自主研發(fā)的MG2生物反應(yīng)器，研究了免疫細(xì)胞HL60和JURKAT在MG2生物反應(yīng)器不同轉(zhuǎn)速下（不同的微重力效應(yīng)水平）的生物學(xué)響應(yīng)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在84H后，微重力效應(yīng)對免疫細(xì)胞的增殖、粘附和跨膜遷移能力都有一定的調(diào)控作用，但是不影響細(xì)胞的凋亡和兩種粘附分子的表達(dá)（LFA1PSGL1）。在實驗中我們發(fā)現(xiàn)MG2生物反應(yīng)器對免疫細(xì)胞生物學(xué)行為的影響程度是和裝置的轉(zhuǎn)速密切相關(guān)的，證明了不同微重力效應(yīng)水平對免疫細(xì)胞生物學(xué)行為影響的差異性。本文通過研究靜態(tài)力學(xué)微擾不同細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響，對地基模擬微重力效應(yīng)研究提出了新概念‖通過探究一個與重力相關(guān)的靜態(tài)力學(xué)刺激對細(xì)胞的影響，從另一個角度觀察真正微重力效應(yīng)的作用。同時利用生物反應(yīng)器研究免疫細(xì)胞的生物學(xué)行為變化則為地基模擬微重力效應(yīng)研究提供了新方法‖通過觀察不同微重力模擬效應(yīng)水平對免疫細(xì)胞的影響來探究真正微重力（模擬效應(yīng)）的影響。這些對于解決現(xiàn)今地基模擬實驗的局限性和促進未來地基模擬研究的發(fā)展具有重要的理論指導(dǎo)和實踐應(yīng)用價值。

簡介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文分類號密級UDC編號學(xué)位論文5氮雜氮雜2脫氧胞苷對人胰腺癌細(xì)胞株脫氧胞苷對人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANCPANC1細(xì)胞生細(xì)胞生物學(xué)行為的影響物學(xué)行為的影響及機制及機制EFFECTANDMECHANISMOF5AZACDRONBIOLOGICALBEHAVIOROFPANCREATICCARCINOMACELLLINEPANC1王蒙指導(dǎo)教師姓名湯志剛教授安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院申請學(xué)位級別碩士專業(yè)名稱外科學(xué)（普外）提交論文日期20133論文答辯日期20135學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)20136答辯委員會主席評閱人2013年5月安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部門或其指定機構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKICNKI中國知識資源總庫，在中國博碩士學(xué)位論文評價數(shù)據(jù)庫中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期

簡介：目的檢測SOX15基因于結(jié)腸癌中的表達(dá)高低以及對細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響。方法RTPCR被用于檢測SOX15在CACO2、SW480、HT29、HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞以及正常結(jié)腸組織中的表達(dá)程度高低。通過脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000將重組質(zhì)粒PEGFPN1SOX15與空質(zhì)粒PEGFPN1轉(zhuǎn)染入CACO2及SW480結(jié)腸癌細(xì)胞后應(yīng)用RTPCR及WESTERNBLOT分別檢測SOX15在CACO2及SW480細(xì)胞中MRNA以及蛋白質(zhì)表達(dá)水平；CCK8檢測SOX15對CACO2及SW480細(xì)胞增殖的影響、克隆形成觀察癌細(xì)胞克隆形成率、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率、TRANSWELL檢測SOX15對細(xì)胞遷移、侵襲功能的調(diào)節(jié)控制。結(jié)果與人正常結(jié)腸組織相比，SOX15在CACO2、SW480、HT29、HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞中MRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯低于其在正常結(jié)腸組織的表達(dá)水平。PEGFPN1SOX15轉(zhuǎn)染組細(xì)胞MRNA和蛋白表達(dá)顯著高于PEGFPN1對照組細(xì)胞。與PEGFPN1對照組相比，PEGFPN1SOX15轉(zhuǎn)染組可明顯抑制細(xì)胞增殖及遷移侵襲能力，抑制癌細(xì)胞克隆形成率，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論SOX15在結(jié)腸癌細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá)SOX15可明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖及遷移、侵襲能力，并促進細(xì)胞凋亡。

簡介：目的研究體外持續(xù)傳代對兩種人胎兒來源干細(xì)胞（臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和羊膜上皮細(xì)胞）基本特性、致瘤性及干性等生物學(xué)特性的影響，為干細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控提供實驗依據(jù)。方法使用相同方法分離獲得的原代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞N3和羊膜上皮細(xì)胞N8進行持續(xù)傳代培養(yǎng)，研究第7、14和21代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞基本特性（形態(tài)、增殖、細(xì)胞周期、凋亡和衰老）、致瘤性（染色體數(shù)量和致瘤基因表達(dá)）以及干性（表型、干性基因表達(dá)、心肌、神經(jīng)和肝分化能力）的差別，并探討原代羊膜上皮細(xì)胞干性標(biāo)志物SSEA4的表達(dá)水平與體外培養(yǎng)后細(xì)胞表型以及分化能力變化的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果1持續(xù)傳代對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響1持續(xù)傳代對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞基本特性的作用規(guī)律初代的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞呈長梭形，隨著傳代次數(shù)的增加，部分細(xì)胞變得寬大，細(xì)胞增殖速率下降，出現(xiàn)了S和G2期阻滯現(xiàn)象，但三個代數(shù)細(xì)胞間無統(tǒng)計學(xué)差異。此外，三個代數(shù)細(xì)胞均未發(fā)生明顯凋亡活細(xì)胞（ANNEXINVPI細(xì)胞）比例均超過90％，無統(tǒng)計學(xué)差異。然而，與第7代及第14代相比，第21代衰老細(xì)胞比例顯著增高P70032±0018P140062±0038P210229±0019。衰老相關(guān)的P21基因表達(dá)也顯著升高P210050±0020P140007±0001P70010±0004P＜005。上述實驗結(jié)果表明，第14代以內(nèi)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能夠較好地保持其基本特性，而第21代細(xì)胞則出現(xiàn)了明顯衰老。2持續(xù)傳代對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞致瘤性的作用規(guī)律三個代數(shù)細(xì)胞染色體數(shù)量未發(fā)生變化，癌基因ERAS的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異。然而，第21代癌基因CMYC0047±0005的表達(dá)則顯著高于第70014±0006和14代0011±0002P＜005。這些結(jié)果表明，盡管第21代細(xì)胞染色體數(shù)量正常，但癌基因的表達(dá)會出現(xiàn)明顯上調(diào)，提示高代數(shù)細(xì)胞可能具有較高的致瘤性。由于第21代細(xì)胞衰老和癌基因表達(dá)均顯著升高，因此在之后的干性研究中只選擇使用第7和第14細(xì)胞。3持續(xù)傳代對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干性的作用規(guī)律三個代數(shù)細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞典型的表面標(biāo)志物CD73、CD90和CD105表達(dá)均高于99％，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記物HLADR和CD45，各代數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。與第7代細(xì)胞相比，第14代細(xì)胞的干性基因OCT34P72378E5±1347E5P141955E5±3692E6、NANOGP71063E5±5722E6P146517E6±2666E6、VIMENTINP70507±0144，P140323±0041，外胚層祖細(xì)胞標(biāo)志物NESTINP79421E4±2011E4，P146952E4±2906E4和中胚層祖細(xì)胞標(biāo)志物GATA4（P73215E5±3716E5，P145082E6±5293E6）的表達(dá)有下調(diào)趨勢，內(nèi)胚層祖細(xì)胞標(biāo)志物AFPP75891E5±2439E5，P149916E5±2620E5有上調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異。另外，心肌誘導(dǎo)分化實驗結(jié)果顯示第7代細(xì)胞的心肌標(biāo)志物ΑACTININ的蛋白表達(dá)0111±0030顯著高于第14代0033±0006細(xì)胞P＜005，這說明第7代細(xì)胞具有較高的心肌分化能力。神經(jīng)誘導(dǎo)分化實驗結(jié)果則顯示第14代細(xì)胞中NESTIN272±120％、ΒTUBULINⅢ704±45％陽性細(xì)胞的比例較之第7代NESTIN209±08％ΒTUBULINⅢ386±102％細(xì)胞表達(dá)升高，ΒTUBULINⅢ有統(tǒng)計學(xué)差異P＜005，NESTIN無統(tǒng)計學(xué)差異P＞005，這說明第14代細(xì)胞具有較高的神經(jīng)分化能力。此外，早期肝誘導(dǎo)分化實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第7代細(xì)胞的肝功能標(biāo)志物ALBUMIN的基因P716433±12921，P1412967±1358P＜005及蛋白表達(dá)P70382±0270，P140260±0127有高于P14代的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異，提示第7代細(xì)胞可能具有較高的肝分化潛能，但受到個體差異的影響。2持續(xù)傳代對羊膜上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響流式細(xì)胞儀分析表明，不同樣本來源的原代羊膜上皮細(xì)胞干性標(biāo)志物SSEA4的表達(dá)在267％97％之間，存在很大的個體差異。第2代細(xì)胞與原代細(xì)胞相比，SSEA4表達(dá)水平明顯降低，其下降程度與原代細(xì)胞SSEA4的表達(dá)水平無關(guān)。另外，傳代培養(yǎng)后羊膜上皮細(xì)胞的心肌分化潛能也存在很大個體差異，且其差異與原代細(xì)胞SSEA4表達(dá)水平的高低無關(guān)。結(jié)論1第14代之內(nèi)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞較好地保持了其基本特性，未發(fā)生明顯衰老，且具有較低的癌基因表達(dá)，因此更適合再生醫(yī)學(xué)研究與應(yīng)用。2臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化實驗表明，盡管受到個體差異的影響，但是體外持續(xù)傳代對不同分化方向有不同的作用規(guī)律，較低代數(shù)細(xì)胞的心肌及肝分化能力可能較高，而較高代數(shù)細(xì)胞的神經(jīng)分化能力可能較強，因此在具體應(yīng)用中需要考慮體外傳代對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具體分化方向及能力的影響，盡可能選擇適合代數(shù)的細(xì)胞，同時加強干細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控，以提高安全性和有效性。3不同樣本來源的原代羊膜上皮細(xì)胞的SSEA4表達(dá)水平受到個體差異的影響，需要建立更準(zhǔn)確的臨床樣本篩選指標(biāo)來穩(wěn)定獲得原代高表達(dá)SSEA4的胎兒樣本，以實現(xiàn)對羊膜上皮細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控。另外，體外培養(yǎng)過程中SSEA4的表達(dá)水平受到培養(yǎng)條件的影響，需要繼續(xù)優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持其高表達(dá)。此外，羊膜上皮細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的能力受到樣本個體差異以及培養(yǎng)條件的影響，在今后還需要進一步研究。

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文黏蛋白MUCL在糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)人卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用及機制研究EFFECTSOFMUCINLONTHEREGULATIONOFBIOLOGICALBEHAVIORINDUCEDBYGLUCOCORTICOIDSINOVARIANCANCERCELLANDITSPOTENTIALMECHANISMS研究生姓名殷麗娟指導(dǎo)教師盧建教授第二軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部導(dǎo)師組成員王燕老師學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位答辯日期2013年5月二。一三年五月目錄中文摘要?????????????????????????一1．英文摘要?????????????????????????一3．英文縮略詞????????????????????????一5．JL．L日U舌????????????????????????????????????．．．6．材料與試劑????????????????????????一9一實驗方法?????????????????????????．12．實驗結(jié)果?????????????????????????．17．討{侖????????????????????????????????????．26．小結(jié)????????????????????????????????????．29．參考文獻?????????????????????????．30．綜述????????????????????????????????????．34．致謝????????????????????????????????????．49．