缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)基因沉默后對SW480人結腸癌細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的：臨床研究表明HIF-1α與結腸癌的臨床特征密切相關，本研究采用脂質體法轉染介導的siRNA干擾技術，將干擾序列轉染SW480人結腸癌細胞并沉默HIF-1α表達，同時，觀察沉默后SW480細胞生物學特性的改變以期闡明HIF-1α基因對結腸癌腫瘤特性的影響。
　　方法:使用脂質體法siRNA技術轉染SW480人結腸癌細胞株，并根據(jù)轉染時處理方式的不同將細胞株分為干擾組、陰性對照組、空載體組、空白對照組；使用Real-time P

2、CR技術對細胞株HIF-1α的mRNA表達進行檢測并計算沉默率；使用Western-blot技術對細胞株HIF-1α的蛋白表達程度進行檢測，并評估蛋白表達水平；使用四甲基偶氮唑鹽法(MTT)技術評估細胞株的細胞增殖能力；采用流式細胞儀技術及AnnexinV-PI雙染法檢測細胞株凋亡；采用Luminometer技術檢測細胞株的細胞內ATP含量。
　　結果：干擾組沉默率均>80％，空載體組及陰性對照組均<6%，證明SW480細胞HIF

3、-1α的表達受抑，符合預期要求；干擾組、陰性對照組、空載體組、空白對照組的HIF-1α蛋白的相對表達量在各時間點具有明顯統(tǒng)計學差異（F=12.473，p=0.012）。干擾組蛋白的相對表達量明顯低于其他3個對照組（P均<0.05），但其余三組之間無統(tǒng)計學差異；SW480人結腸癌細胞各時間點各組間OD值均數(shù)均有差異(P＜0.05)；干擾序列轉染組與陰性對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，且細胞增殖隨時間延長明顯受抑；HIF-1α干擾組、

4、陰性對照、空載體、空白對照組早期凋亡率分別為45.36%、4.43、3.48%、3.41%。晚期凋亡及壞死率分別為22.92%、4.75%、3.65%、3.74%。干擾組早期凋亡率及晚期凋亡和壞死率較陰性對照組、空載體和空白對照組顯著增加（P均<0.05），而后三者間兩兩比較無顯著性差異（P>0.05）；人結腸癌SW480細胞株細胞內ATP濃度在各時間各組間的表達均有明顯統(tǒng)計學差異（P均＜0.05)；組內多重比較可知：培養(yǎng)后1-5天均表

5、現(xiàn)為干擾組ATP含量明顯低于陰性對照組、空載體組及空白對照組，而其余三組之間兩兩比較P均>0.05。此外，所有分組的人結腸癌SW480細胞株細胞內ATP濃度均隨觀察時間的推移而進行性降低（P均<0.05）。
　　結論：脂質體法siRNA技術轉染干擾序列有效沉默人結腸癌SW480細胞株HIF-1α表達；HIF-1α沉默后可抑制人結腸癌SW480細胞生長，促進腫瘤細胞早期及晚期凋亡，并降低腫瘤細胞的ATP生成，且上述影響呈時間依賴性。