HRC在肝星狀細(xì)胞活化及肝纖維化中的作用研究.pdf

1、目的：
　　肝纖維化是肝硬化的早期階段，如果纖維化未得到及時(shí)干預(yù)則會(huì)進(jìn)入肝硬化階段。肝纖維化發(fā)生發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)是肝臟星狀細(xì)胞（HSC）的活化。鈣離子參與多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，在肝臟纖維化中也具有一定意義。HRC是一種鈣離子結(jié)合蛋白，在維持和調(diào)節(jié)人體內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。既往研究表明，HRC在心臟纖維化及肝癌的遷移增長(zhǎng)中有一定作用,但目前在肝臟纖維化中的作用尚無(wú)研究。本研究旨在探討HRC是否在肝纖維化的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮作用

2、。
　　方法：
　　免疫組織化學(xué)、RT-PCR和Western blot檢測(cè)HRC在肝纖維化患者和TAA誘導(dǎo)肝纖維化模型大鼠肝臟中HRC的表達(dá)和分布。梯度離心方法分離大鼠原代肝星狀細(xì)胞；常規(guī)培養(yǎng)及用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1刺激原代大鼠肝星狀細(xì)胞,檢測(cè)肝纖維化相關(guān)指標(biāo)及HRC的表達(dá)變化。利用特異性siRNA HRC轉(zhuǎn)染LX-2細(xì)胞系來(lái)下調(diào)HRC的表達(dá)，利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)肝纖維化相關(guān)指標(biāo)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)

3、激關(guān)鍵蛋白分子；用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）激動(dòng)劑（TG）和抑制劑（4-PBA）處理LX-2細(xì)胞后，利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)HRC、α平滑肌蛋白(α-SMA)、I型膠原（COL1A1）、IV型膠原（COL3A1）、CTGF、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白分子，例如C/EBP蛋白（CHOP）、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、激活轉(zhuǎn)錄因子4（ATF4）。
　　結(jié)果：
　　HRC在肝纖維化患者和TAA誘導(dǎo)的纖維化模型大鼠肝臟

4、中表達(dá)水平較正常組增加（p<0.05）。在HSC培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞的活化會(huì)誘導(dǎo)HRC表達(dá)以及發(fā)生ERS。在大鼠原代HSC和LX-2細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程中，與TGF-β共孵育可增加HRC的表達(dá)（p<0.05）且呈劑量依賴關(guān)系。在LX-2細(xì)胞系中抑制HRC的表達(dá)會(huì)降低肝星狀細(xì)胞的活化程度，減弱該細(xì)胞系的增殖和遷移能力（p<0.05）。另外，在LX-2細(xì)胞中抑制HRC的表達(dá)后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)，包括ATF4、GRP78和CHOP，表達(dá)量顯著降低（p<0.