枯草桿菌和渾球紅細菌ALAD和釀酒酵母VMA4VMA10的結構生物學研究.pdf

1、(Ⅰ)5-氨基乙酰丙酸脫水酶(5-aminolaevulinic acid dehydratase，ALAD)在四吡咯的生物合成中發(fā)揮關鍵的作用。它將兩個5-氨基乙酰丙酸(5-aminolaevulinicacid，ALA)脫水縮合成膽色素原。在接下來的反應中，膽色素原脫乙酰酶和尿卟、啉原合成酶催化四個膽色素原形成一個環(huán)狀的四吡咯尿卟啉原Ⅲ。這些反應是多種重要金屬輔基基團例如血紅素、葉綠素和維生素B12生物合成途徑中的相同步驟。

2、　　 在本論文中，我們構建了枯草桿菌源和渾球紅細菌源的5-氨基乙酰丙酸脫水酶的表達載體，并純化了兩個蛋白。使用懸滴氣相擴散法得到了兩個蛋白的晶體。在上海同步輻射光源收集到枯草桿菌源蛋白最高分辨率2.7A的衍射數(shù)據(jù)。晶體的空間群是P42212，晶胞參數(shù)是a=b=129.389，c=111.445。初步分析一個晶體學不對稱單位含有三個蛋白質(zhì)分子，對應的Matthews Coefficient是2.16 A3/Da，溶劑含量是43.08％。

3、
　　 (Ⅱ)V型ATP酶(Vacuolar ATPase)是負責調(diào)控胞內(nèi)細胞器內(nèi)外質(zhì)子平衡的關鍵元件。它依賴于ATP水解產(chǎn)生的能量推動質(zhì)子在膜中的運輸。V型ATP全酶主要由整合在膜上的質(zhì)子轉(zhuǎn)運通道V0結構域和處于胞質(zhì)中的ATP結合水解元件V1結構域所組成，它還包括了將兩個大結構域相銜接的可以轉(zhuǎn)動的中央桿和起固定作用的外周桿。
　　 本研究中，我們表達純化了釀酒酵V源V型ATP酶外周桿的關鍵部分:E亞基和G亞基組成的亞復