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文檔簡介
1、在HIV-1侵入細胞的過程中,包膜蛋白(Env)發(fā)揮了關鍵作用,介導了病毒與宿主細胞受體、共受體的結合以及病毒包膜與宿主細胞細胞膜的融合。在膜融合過程中,6-HB結構的形成是必需的步驟,因此其成為膜融合抑制藥物作用的關鍵靶點。SC29EK與SFT同屬于通過抑制病毒6HB形成來阻斷病毒與細胞膜融合過程的第三代HIV-1膜融合抑制劑,都具有螺旋內(nèi)鹽橋的設計,相比前代抑制劑其擁有更好的結構穩(wěn)定性和抗病毒效果。
前期利用SC29EK篩
2、選出了耐藥株gp41蛋白保守序列上發(fā)生的氨基酸突變位點(Gln39、Asn43、Glu49),分別簡稱Q39R、N43K、E49A,利用SFT篩選出了耐藥株gp41蛋白保守序列上發(fā)生的氨基酸突變位點(Val38、Ala47、Gln52),分別簡稱V38A、A47I、Q52R。本課題以能夠表達HIV-1病毒Env包膜蛋白的質(zhì)粒作為模板進行定點突變,獲得了15份突變質(zhì)粒,分別對應篩選出來的點突變及點突變組合。利用capture ELISA技
3、術檢測證實了這些點突變或者點突變組合不會影響Env蛋白的表達。利用轉染表達的包含點突變或者點突變組合的假病毒,分析了突變對病毒入侵能力、膜融合能力以及對膜融合抑制劑SC29EK與SFT耐藥性的影響。利用以病毒NHR多肽N36為模板合成的包含有待研究點突變以及點突變組合的12種多肽,分析了突變對6-HB結構穩(wěn)定性的影響,對N36與膜融合抑制劑之間結合力的影響。利用ELISA技術和6-HB構象特異性抗體,還探索了突變對6-HB構象的影響。<
4、br> 綜合來說,本課題主要從發(fā)現(xiàn)的點突變以及點突變組合對病毒耐藥性、病毒Env功能、病毒6-HB結構穩(wěn)定性、病毒N肽與膜融合抑制劑結合能力的影響這幾個方面,來探討SC29EK、SFT耐藥株的耐藥機制。通過對實驗結果的分析,本課題研究得出以下結論:(1)N43K使得突變毒株對SC29EK高度耐藥,當N43K與Q39R或者E49A組合,其對SC29EK耐藥性會進一步提升,Q52R使得突變毒株對SFT高度耐藥,Q52R與V38A、A47I
5、結合會使其對SFT耐藥性大幅提升;(2)這些突變同時使得毒株獲得對T20、C34、2P23等不同膜融合抑制劑的交叉耐藥能力;(3)部分突變能降低N肽與抑制劑的結合能力,部分突變能增強N肽與內(nèi)源性C肽的結合能力,點突的組合還能發(fā)揮協(xié)同作用,從而產(chǎn)生更強的耐藥性;(4)突變使病毒獲得耐藥性的同時,會使病毒Env蛋白的功能部分喪失;(5)點突變會改變病毒6-HB的構象。本課題研究為理解HIV-1耐藥株的耐藥機制提供了新的視角,加深了對gp41
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