HIV-1整合酶抑制劑篩選模型的構(gòu)建.pdf

1、HIV-1整合酶(IN)具有催化HIV-1病毒cDNA與宿主細(xì)胞基因組DNA整合的作用，是HIV-1病毒的三大關(guān)鍵酶之一。目前，抗IN藥物研究較少，F(xiàn)DA批準(zhǔn)上市的藥物中只有一種IN鏈轉(zhuǎn)移抑制劑----raltegravir，IN作為HIV-1藥物開發(fā)新靶點(diǎn)可以在一定程度上避免HIV-1產(chǎn)生抗藥性，且IN在人體內(nèi)沒有同源類似物，抗IN藥物毒性較低。因此，IN是抗HIV-1研究的重要靶點(diǎn)。
　　 本研究利用IN與宿主細(xì)胞修復(fù)系統(tǒng)之

2、間的關(guān)系建立了rad52-釀酒酵母致死模型。模型以IN鏈轉(zhuǎn)移中切割宿主細(xì)胞基因組活性為靶點(diǎn)，以pYES2.0為載體在酵母細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)IN引起雙鏈斷裂(DSBs);同時(shí)用Cre/loxP法敲除酵母的rad52基因，構(gòu)建酵母的雙鏈斷裂修復(fù)蛋白缺失菌株，引起酵母生長(zhǎng)率嚴(yán)重降低，通過檢測(cè)吸光度來計(jì)算酵母的生長(zhǎng)抑制率。用raltegravir作為正對(duì)照，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT作為負(fù)對(duì)照檢測(cè)模型，該模型特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，適于大規(guī)模藥物的

3、初步篩選。IN化學(xué)合成抑制劑大多集中于抑制IN的鏈轉(zhuǎn)移活性，易造成HIV-1病毒RNA突變，產(chǎn)生抗藥性。天然產(chǎn)物大多具有多效性，可作為化學(xué)合成抑制劑的先導(dǎo)化合物。本研究選取多酚含量較高的香菇、草菇、雙孢菇，使用甲醇浸提，硅膠板分離的方法純化多酚;其中香菇分離到兩個(gè)組分X1、X2，草菇分離到兩個(gè)組分C1、C2，雙孢菇分離到三個(gè)組分S1、S2、S3。其中，香菇組分X1的抗腦脂質(zhì)過氧化活性達(dá)到86.23％，雙孢菇組分S1的抗紅細(xì)胞溶血活性達(dá)到