復(fù)合型非病毒載體的構(gòu)建及其生物學(xué)性能研究.pdf

1、陽離子脂質(zhì)體對陰離子型聚電解質(zhì)陰離子敏感,對帶負電荷的DNA有較高的轉(zhuǎn)運能力,還能轉(zhuǎn)運RNA、核糖體及其他大電荷的分子和大分子物質(zhì)進入細胞,其轉(zhuǎn)染效率比其它脂質(zhì)體高出許多倍，因而被廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)移技術(shù)中。但是陽離子脂質(zhì)體與病毒載體相比，具有轉(zhuǎn)運效率較低，細胞毒性大等缺點。本課題在合成的陽離子類脂中加入不同助劑制備成新型的復(fù)合型非病毒基因載體，以期提高轉(zhuǎn)運效率，降低細胞毒性。
　　 本實驗從復(fù)合型非病毒載體的物化性質(zhì)與生物性能兩

2、個方面研究復(fù)合型非病毒載體以及它與DAN的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)、粒徑、表面形態(tài)等與轉(zhuǎn)運效率、細胞毒性的關(guān)系，以便為提高轉(zhuǎn)運效率提供研究依據(jù)。主要包括瓊脂糖凝膠電泳分析復(fù)合物型非病毒載體與質(zhì)粒pGFP-N2(報告基因)DNA的結(jié)合能力，以商品試劑 Lipofectamine2000和DOTAP為對照，利用脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hep-2細胞，熒光顯微鏡觀察其基因轉(zhuǎn)染效率，利用MTT法評價轉(zhuǎn)染試劑的毒性。
　　 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明：在

3、陽離子脂質(zhì)體中加入少量或等量DOPE，延滯DNA能力增強，DOPE量多時反而減弱；用蔗糖酯修飾的陽離子脂質(zhì)體延滯能力變化不明顯；加入殼聚糖脂質(zhì)體，延滯DNA的能力明顯增強。原子力顯微鏡結(jié)果顯示，陽離子脂質(zhì)體在云母片上形成的顆粒為球形或橢圓形，粒徑分布較為均勻；陽離子脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物在云母片上的顆粒形狀不規(guī)則，粒徑分布不均且比空白脂質(zhì)體的粒徑大。殼聚糖修飾的脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的粒徑變大，形狀更加的不規(guī)則。加入蔗糖酯與DOPE后，轉(zhuǎn)染