擬南芥PPR蛋白AtECB2的功能研究.pdf

1、AtECB2蛋白是一個(gè)已報(bào)道的定位于葉綠體的蛋白，它屬于PPR蛋白家族中的DYW亞群。以前的實(shí)驗(yàn)證明該蛋白參與到accD和ndhF的RNA編輯過(guò)程，即這兩個(gè)基因的在RNA轉(zhuǎn)錄中發(fā)生了特異性的胞嘧啶(Cytidine)到尿嘧啶(uridine)的轉(zhuǎn)變。在本論文中，我們制備了針對(duì)該蛋白的特異性的多克隆抗體，通過(guò)RNA免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(RIP)實(shí)驗(yàn)證明該蛋白質(zhì)直接結(jié)合在其所參與的三個(gè)編輯位點(diǎn)上下游約200b的位置上；并且將含有PPRmotif的

2、一段蛋白質(zhì)體外誘導(dǎo)表達(dá)成功。RARE1據(jù)報(bào)道參與到accDRNA編輯的一個(gè)PPR蛋白質(zhì)。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)證明RARE與AtECB2蛋白質(zhì)的一段DYW結(jié)構(gòu)域在酵母體內(nèi)并沒(méi)有相互作用。同時(shí)，我們分析了atecb2-2突變體。在早期發(fā)育過(guò)程中，該突變體的真葉呈現(xiàn)一個(gè)由黃轉(zhuǎn)綠的表型，透射電鏡結(jié)果顯示該突變體早期真葉葉綠體發(fā)育有缺陷，隨著真葉轉(zhuǎn)綠，葉綠體發(fā)育逐漸正常。Northernbolt實(shí)驗(yàn)證實(shí)在這個(gè)轉(zhuǎn)綠的過(guò)程中，rbcL的活性可以恢復(fù)到野生型