鱖魚泛素連接酶基因的克隆、表達(dá)及功能研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文鱖魚泛素連接酶基因的克隆、表達(dá)及功能研究姓名：張慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：水生生物學(xué)指導(dǎo)教師：何建國(guó)20070609張慧中山大學(xué)碩士學(xué)位論文少。進(jìn)行了鱖魚E3的大腸桿菌原核表達(dá)。以pGEX4T1原核表達(dá)載體成功構(gòu)建了pGEXE3質(zhì)粒并分別轉(zhuǎn)化BL21(DE3)后獲得了目的蛋白的高效表達(dá)，且表達(dá)蛋白可溶性良好。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)證實(shí)了正確表達(dá)了目的蛋白為了進(jìn)一出研究該基因的功能，采用經(jīng)典的體外泛素化實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證該E3泛素連接酶

2、的活性采用UbcH2，UbcH3，UbcH5aUbcH5cUbcH7，UbcH9UbcHl0，UbcHl2E2MFC鱖魚E2)8種不同類型的泛素聚合酶E2與該E3進(jìn)行體外泛素化實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其可以與UbcH5a以及UbcH7協(xié)作完成體外泛素化；另外還跟鱖魚的自身的泛素聚合酶E2作用，并且兩者之問體外泛素化作用最強(qiáng)這些結(jié)果表明該蛋白具有E3泛素連接酶活性。本文首次從鱖魚中獲得E3全長(zhǎng)eDNA序列，并證明了其泛素連接酶活性。uPP途徑是生命活動(dòng)