血必凈干預(yù)重癥急性胰腺炎致肝損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一章重癥急性胰腺炎致肝損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:
　　通過建立?；悄懰徕c誘導(dǎo)的重癥急性胰腺炎（SAP）大鼠模型，觀察 SAP大鼠胰腺大體及組織損傷情況、肝臟大體及組織損傷情況、肝細(xì)胞凋亡情況及肝臟 CD4 mRNA、IL-22及p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)情況，探討上述指標(biāo)在重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷中的作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　將48只Sprague-Dawley(

2、SD)雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham operation，SHAM組）（n=24）、重癥急性胰腺炎組（SAP組）（n=24），每組再分3h、6h、12h三個(gè)亞組（n=8）。SHAM組僅翻動(dòng)胰腺，不注射?；悄懰徕c，SAP組用5％?；悄懰徕c(Sodium Taurocholate，Na Tc)經(jīng)胰膽管逆行注射制備SAP模型,分別于造模后各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，采用無菌操作法采集大鼠腹主動(dòng)脈血、收集胰腺及肝臟標(biāo)本待測。采用全自動(dòng)生化儀檢測血清淀

3、粉酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平,采用HE染色觀察胰腺及肝臟組織損傷情況并對其進(jìn)行病理評分，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）法檢測肝臟CD4在mRNA水平的表達(dá)情況；采用免疫組化染色及Western blotting法檢測肝臟組織IL-22、p-STAT3、Cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)；采用TUNEL法觀察肝臟細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　SAP組制模

4、后各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、ALT和AST水平均高于相同時(shí)間假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SAP組胰腺及肝組織病理評分均明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SAP組肝臟CD4mRNA及IL-22蛋白表達(dá)與假手術(shù)組相比明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SAP組肝臟p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白較假手術(shù)組表達(dá)明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TUNEL法檢測肝臟細(xì)胞凋亡顯示

5、重癥急性胰腺炎組肝細(xì)胞凋亡較假手術(shù)組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、采用5%牛磺膽酸鈉經(jīng)胰膽管逆行注射制備重癥急性胰腺炎模型,病理學(xué)證實(shí)胰腺出現(xiàn)不同程度水腫、出血、壞死及炎性細(xì)胞浸潤，表明大鼠重癥急性胰腺炎制模成功，而且模型穩(wěn)定，可重復(fù)性好。
　　2、隨重癥急性胰腺炎的發(fā)展，胰腺病理評分逐漸升高，大鼠血清 ALT與 AST逐漸升高，肝組織病理學(xué)損傷亦進(jìn)行性加重，證實(shí)重癥急性胰腺炎時(shí)出現(xiàn)

6、了肝功能障礙和肝臟損傷。
　　3、隨著重癥急性胰腺炎發(fā)展，大鼠的肝細(xì)胞凋亡明顯增加，肝臟組織中 CD4 mRNA、IL-22蛋白表達(dá)進(jìn)行性減弱，p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)增強(qiáng)，說明以上指標(biāo)可能與大鼠SAP肝損傷有關(guān)。
　　第二章血必凈干預(yù)重癥急性胰腺炎致肝損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：
　　通過觀察 SAP大鼠經(jīng)血必凈治療后胰腺大體及組織損傷情況、肝臟大體及組織損傷情況、肝細(xì)胞凋亡

7、等的變化來了解血必凈對 SAP大鼠胰腺及肝臟損傷的干預(yù)作用；同時(shí)通過觀察大鼠肝臟組織CD4 mRNA、IL-22及p-STAT3、Cleaved Caspase3蛋白表達(dá)情況、肝細(xì)胞凋亡等的變化，來了解血必凈對 SAP合并肝損傷治療作用的可能機(jī)制。
　　方法：
　　將72只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（SHAM組）（n=24）、重癥急性胰腺炎組（SAP組）（n=24）和血必凈干預(yù)組（XBJ組）（n=24），每組再分3h、6h

8、、12h三個(gè)亞組（n=8）。以0.1 mL/min速率向膽胰管內(nèi)注入5%?；悄懰徕c（0.1 mL/100 g）制備SAP模型。XBJ組在制模后腹腔內(nèi)一次性注射血必凈注射液（4 mL/kg）。SHAM組打開腹腔后僅翻動(dòng)胰腺，但不注射藥物。分別于造模后各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，無菌操作法分別收集大鼠腹主動(dòng)脈血、胰腺及肝臟標(biāo)本待測。采用全自動(dòng)生化儀檢測血清淀粉酶、ALT和AST水平,采用HE染色觀察胰腺及肝臟組織損傷情況并對其進(jìn)行病理評分，采用實(shí)時(shí)定

9、量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）法檢測肝臟CD4在mRNA水平的表達(dá)情況；采用免疫組化、Western blotting法檢測肝臟組織IL-22、p-STAT3、Cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)；采用TUNEL法觀察肝臟細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　SAP組、XBJ組制模后各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、ALT和AST水平均高于同期SHAM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；XBJ組制模后各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、

10、ALT、AST水平均低于胰腺炎組同期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SAP組、XBJ組胰腺組織及肝組織病理評分明顯高于SHAM組，但XBJ組胰腺組織及肝組織病理評分較SAP組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。XBJ治療組肝臟組織CD4 mRNA及IL-22蛋白表達(dá)較SAP組明顯增強(qiáng)，XBJ組肝臟p-STAT3及Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)較SAP組明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。XBJ組大鼠肝細(xì)胞