父本基因組在小鼠卵母細胞中的主動去甲基化研究.pdf

1、受精后小鼠卵子中父本基因組的主動去甲基化對于植入前的胚胎發(fā)育是非常重要的。然而植入前胚胎主動去甲基化的機制仍不甚明了，DNA去甲基化酶是否確實存在于MⅡ卵母細胞胞質(zhì)中還是源自母本基因組也未有確切結(jié)論。 為判定MⅡ卵的胞質(zhì)還是母本基因組對于父本基因組的主動去甲基化起作用，我們將凍融的精子頭注射到正常或去核的MⅡ卵中，然后研究了其中父本基因組的甲基化狀態(tài)。我們通過5-甲基胞嘧啶免疫染色的方法比較了單倍體和二倍體孤雄胚胎(通過注射一個

2、或兩個精子頭到去核的MⅡ卵)、ICSI(introcytoplasmicsperminjection)胚胎、三倍體胚胎(注射兩個精子頭到完整MⅡ卵)以及原核移植生產(chǎn)的重構(gòu)孤雄胚胎。結(jié)果顯示所有實驗組的胚胎都能發(fā)生父本基因組的主動去甲基化。 我們還使用bisulfite測序的方法檢測了原核期和囊胚期持家基因和印跡基因CpG位點的甲基化變化，來比較植入前孤雄胚胎發(fā)育中兩種基因的甲基化模式。我們收集了雙精注射和原核移植生產(chǎn)的二倍體孤雄

3、胚胎受精后8h的原核和隨后發(fā)育而成的囊胚，對于持家基因α-actin以及印跡基因H19和Igf2之間的ICR(imprintingcontrolregion)的甲基化水平進行了分析。通過bisulfite處理后測序，結(jié)果顯示精子中處于完全甲基化狀態(tài)的α-actin基因在受精后所有CpG位點都完全去甲基化了，并且可能維持這種狀態(tài)至囊胚期。相反，ICR在孤雄胚胎原核期和囊胚期的甲基化水平都只是稍有降低。我們的結(jié)果說明了父本基因組中的持家基因