自體干細(xì)胞激活療法治療2型糖尿病大鼠的療效及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型，觀察骨髓干細(xì)胞(BSCs)動員并誘導(dǎo)后對T2DM大鼠的降糖作用，研究其對骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)蛋白表達(dá)量的影響，探討該療法可能的降糖作用機(jī)制。
　　 材料和方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動物分組及處理
　　 40只雄性wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為兩組:健康對照組（10只），喂予標(biāo)準(zhǔn)飼料;模型組（30只），高糖高脂飼料喂養(yǎng)2個月聯(lián)合單次小劑量鏈脲佐菌

2、素(STZ)30mg/kg腹腔注射，建立實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型。將模型組隨機(jī)分為糖尿病對照組、單純動員組和動員并誘導(dǎo)組，每組10只。其中單純動員組和動員并誘導(dǎo)組給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)3ug/kg.d，隔日一次，共28天，健康對照組和糖尿病對照組給予相同體積的含中和量胰島素的5％葡萄糖注射液皮下注射。動員并誘導(dǎo)組自注射rh-CSF第2天起給予煙酰胺100mg/kg.d灌胃和促肝細(xì)胞生長素3mg/kg.d腹腔注射，

3、連續(xù)27天，健康對照組、糖尿病對照組和單純動員組給予相同體積的高壓滅菌水灌胃和生理鹽水腹腔注射，以空腹血糖(FBG)、空腹血清胰島素(FINS)、穩(wěn)態(tài)模型的胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、大鼠體重作為檢測指標(biāo)，觀察干細(xì)胞體內(nèi)動員并誘導(dǎo)的降糖作用。
　　 2.監(jiān)測的指標(biāo)及方法
　　 從治療開始，各組大鼠每周測一次體重和血糖。治療前和實(shí)驗(yàn)終止時(shí)分別取血測FINS（放免法），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組大鼠給予10％水合氯醛3.5ml/k

4、g腹腔注射麻醉，心臟取血并用生理鹽水進(jìn)行心臟灌流，留取右下肢股四頭肌，提取骨骼肌細(xì)胞膜總蛋白，采用免疫沉淀和Western Blotting方法檢測骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4(GLUT-4)的蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合單次小劑量STZ腹腔注射后，大鼠FBG及FINS顯著高于健康對照組(p＜0.01)，HOMA-IR顯著升高(p＜0.01)。
　　 治療后，除健康對照組外各組動物體重呈下

5、降趨勢，但模型組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。整個實(shí)驗(yàn)過程中，糖尿病對照組血糖持續(xù)在高水平，至給藥14天時(shí)，單純動員組和動員并誘導(dǎo)組血糖值分別下降16.38％(p＜0.05)、22.91％(p＜0.01)，至給藥28天結(jié)束，單純動員組和動員并誘導(dǎo)組血糖值分別下降23.90％、33.95％，和糖尿病對照組比較，單純動員組差異有顯著意義(p＜0.05)，動員并誘導(dǎo)組差異有極顯著意義(p＜0.01)。治療結(jié)束時(shí)，糖尿病對照組HOMA-I

6、R顯著高于健康對照組(p＜0.01)。與糖尿病對照組相比，治療后單純動員組及動員并誘導(dǎo)組FINS水平無明顯改變(p＞0.05)，而動員并誘導(dǎo)組HOMA-IR顯著降低(p＜0.05)。
　　 (2)糖尿病對照組大鼠骨骼肌GLUT4蛋白表達(dá)量顯著低于健康對照組(p＜0.01)，治療后單純動員組和動員并誘導(dǎo)組GLUT4蛋白表達(dá)量顯著增加(p＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)重組人粒細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合促肝細(xì)胞生