移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療2型糖尿病腎病的研究.pdf

1、目的：探討移植骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞治療經(jīng)小劑量鏈脲佐菌素(STZ)加高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的2型糖尿病高血糖、腎臟病變及胰島素抵抗的可能性。 方法： 1.大鼠MSCs的分離培養(yǎng)和鑒定 1.1無菌條件下取大鼠股骨和脛骨骨髓細(xì)胞做原代培養(yǎng)。 1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD34、CD44、CD45、CD71、CD105的表達(dá)情況。 1.3 Vonkassa和油紅O染色分別檢測(cè)骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂的

2、誘導(dǎo)。 2.2型糖尿病大鼠模型的建立 2.1高脂喂養(yǎng)2月后一次性腹腔注射STZ建立大鼠2型糖尿病模型。 2.2監(jiān)測(cè)大鼠血糖、胰島素、尿蛋白以確定建模是否成功。 2.3用免疫熒光方法(Insulin抗體)檢測(cè)胰腺冰凍切片。 3.尾靜脈注射移植經(jīng)過BrdU標(biāo)記的MSCs 3.1用BrdU標(biāo)記MSCs。 3.2尾靜脈注射移植MSCs。 4.移植后療效的檢測(cè) 4.1監(jiān)測(cè)血糖

3、、總膽固醇、甘油三酯、胰島素、脂聯(lián)素及尿白蛋白的變化。 4.2取胰腺、腎臟切片，分別做H-E染色、PAS染色。 4.3胰腺免疫熒光方法檢測(cè)移植MSCs能在胰腺存在。 4.4腎臟切片免疫熒光方法檢測(cè)是否有外源MSCs存在。 結(jié)果： 1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定及體外標(biāo)記：三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈梭形、漩渦狀生長(zhǎng)。流式細(xì)胞儀表面標(biāo)志鑒定CD34、CD45呈陰性，CD44、CD71、CD105呈陽(yáng)性，符

4、合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)特性，并成功的用BrdU對(duì)其進(jìn)行了標(biāo)記。 2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨、成脂誘導(dǎo)后可表達(dá)骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞特征。 3.建立了大鼠糖尿病腎病模型，其血糖值穩(wěn)定不低于16.7mmol/L，尿白蛋白大于1.9mg/24h。 4.免疫熒光檢測(cè)移植后大鼠體內(nèi)胰島素及BrdU標(biāo)記細(xì)胞：STZ胰島破壞明顯，植入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后胰島增加；STZ組血清胰島素維持較高水平，治療后胰島素水平有所下降(206.08

5、±3.18pmol/l；193.68±3.06pmol/l)，血清脂聯(lián)素升高(2.02±0.24μg/l；3.57±0.72μg/l)，血糖降低(22.51±1.87mmol/l；17.02±1.27 mmol/l)，尿白蛋白分泌減少(1.95±0.21mg/24h；1.30±0.15/24h)，腎小球平均截面積減少(7.554±0.18μm2×103；5.21±0.45μm2x103)，腎小球平均體積縮小(8.12±0.029μm3×