大鼠皮膚挫傷后ICAM-1和NF-κB mRNA表達(dá)與損傷時間的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測大鼠皮膚挫傷后皮膚和肌肉組織中兩種基因(ICAM-1和NF-κB)mRNA的時序性表達(dá)規(guī)律，探討這兩種基因mRNA表達(dá)在損傷時間推斷中的可行性，旨為法醫(yī)實踐中推斷早期皮膚損傷時間提供科學(xué)的實驗依據(jù)。 方法：選取健康成年SD大鼠48只，隨機分為對照組(6只)和實驗組(42只)。均實施麻醉、褪毛后，實驗組大鼠采用自由落體打擊法于右后肢股四頭肌部位造成皮膚挫傷模型，損傷后0.5h、1h、6h、

2、12h、18h、24h、30h七個時間點(每個時間點6只)取挫傷處皮膚及肌肉組織各30mg，置于液氮中保存?zhèn)溆茫粚φ战M大鼠未打擊造傷，其余處理與實驗組相同。以膜吸附技術(shù)為基礎(chǔ)的SV Total RNA提取皮膚和肌肉組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈，梯度濃度稀釋cDNA原液分別作每個基因與內(nèi)參基因(rpL32)相對定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；SYBR Green Ⅰ嵌合熒光法實時熒光定量PCR檢測ICAM-1和NF-κB mRNA逆轉(zhuǎn)錄合

3、成第一條cDNA鏈的相對表達(dá)量，分別與損傷時間進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： (1)紫外-可見光分光光度計和Agilent 2100芯片生物分析儀檢測RNA純度、濃度及完整性較好，均可滿足下一步實驗的要求。 (2)ICAM-1和NF-κB分別與內(nèi)參基因rpL32擴增效率一致，說明內(nèi)參基因選擇正確，引物設(shè)計特異性強、反應(yīng)性能良好。 (3)大鼠皮膚挫傷后ICAM-1 mRNA在皮膚組織中的表達(dá)0.5h達(dá)到峰值，24

4、h下降至正常對照組的7倍隨后繼續(xù)升高；在肌肉組織中于損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(P＜0.001)，6h達(dá)到峰值，18h降至最低后再次升高。 (4)NF-κB mRNA在皮膚組織中于損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(P＜0.05)，6h出現(xiàn)高峰，18h降至正常對照組以下，隨后略有回升；肌肉組織中損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(P＜0.001)，1h達(dá)到峰值，此后逐漸降低并于18h出現(xiàn)第二次表達(dá)高峰。 結(jié)論：大鼠皮膚挫傷后皮膚和肌肉組