泌尿生殖道感染沙眼衣原體多態(tài)膜蛋白F基因的多態(tài)性研究.pdf

1、目的：泌尿生殖道沙眼衣原體的感染是世界范圍內(nèi)最常見的性傳播疾病之一，其感染率已經(jīng)超過淋病奈瑟菌，而躍居性傳播疾病之首，在我國也有逐年上漲的趨勢。與篩查或抗生素治療相比，疫苗接種更經(jīng)濟(jì)，并對(duì)全球控制沙眼衣原體感染有更大的影響，因此普遍認(rèn)為疫苗接種是降低沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,C.t)感染率的最好辦法。目前，雖有大量關(guān)于衣原體的疫苗研究，但至今尚無成熟疫苗問世。目前亞單位疫苗及DNA疫苗的研究焦點(diǎn)是找到合適的

2、抗原，現(xiàn)在研究比較多的抗原有主要外膜蛋白（Major Outer Membrane Protein，MOMP)，衣原體蛋白酶樣活性因子（Chlamydial Protease-Like Activity Factor，CPAF）等，但這些疫苗均未達(dá)到理想的免疫效果。多態(tài)膜蛋白(Polymorphic Membrane Proteins， Pmp)是近年來發(fā)現(xiàn)的位于衣原體外膜上的一類蛋白，分子量比較大，而且具有型特異性，保守性好。同時(shí)研究

3、發(fā)現(xiàn)，Pmp蛋白可能在C.t感染后粘附宿主細(xì)胞和機(jī)體免疫應(yīng)答中具有重要功能，為研制疫苗的潛在抗原。因此本研究的目的是探討泌尿生殖道感染患者沙眼衣原體多態(tài)膜蛋白 F（polymorphic Membrane Proteins F，PmpF）基因的多態(tài)性,為研究多態(tài)膜蛋白F作為沙眼衣原體候選疫苗提供理論依據(jù)。
　　方法：收集2013年1月~2014年12月某院泌尿科、婦科和皮膚科門診泌尿生殖道感染患者送檢的分泌物標(biāo)本，并對(duì)患者的性別、

4、年齡、標(biāo)本來源進(jìn)行詳細(xì)登記。先用沙眼衣原體核酸診斷試劑盒進(jìn)行初篩，將獲得的沙眼衣原體陽性標(biāo)本采用巢氏PCR擴(kuò)增PmpF基因，然后將擴(kuò)增得到的PmpF基因用Alu I、Hae III、Rsa I、Mob I四種內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，酶切圖譜采用Gelcompar II(version3.5)圖像分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用 Dice相似性系數(shù)和平均連鎖聚類法進(jìn)行聚類，得到 UPGMA樹狀圖確定 PmpF基因多態(tài)性。根據(jù)PmpF-RFLP聚樹結(jié)果，選

5、擇代表菌株測定其基因序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，進(jìn)一步驗(yàn)證PmpF-RFLP聚樹結(jié)果，同時(shí)測定代表菌株的OmpI序列并與參考菌株的序列比較，從而確定代表菌株的血清型。通過X2檢驗(yàn)探討沙眼衣原體PmpF基因型與患者性別、年齡和科室的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　12013年1月至2014年12月從婦科、泌尿科和皮膚科三個(gè)科室獲得陽性標(biāo)本178株。178株陽性標(biāo)本中來自男性105個(gè)，占比為59％，來自女性73個(gè)，占比為41%；所有標(biāo)本中來自

6、婦科58個(gè)，占比為32.6%，來自泌尿科88個(gè)，占比為49.4%，來自皮膚科32個(gè)，占比為18%；陽性標(biāo)本患者年齡分布為20歲以下8人，占比為4.5%，20~30歲之間為91人，占比為51.5%，30~40歲之間為59人，占比為33.1%，40~50歲之間的為19人，占比為10.1%，50~60歲之間的只有1人，占比為0.6%。
　　2通過巢氏PCR，178個(gè)陽性標(biāo)本中有117個(gè)標(biāo)本擴(kuò)增獲得PmpF基因，根據(jù)4種內(nèi)切酶酶切圖譜可以

7、分為3個(gè)Type型，依次為Type1、Type2、Type3。3個(gè)Type型中，Type1有3株，占比為2.6%，Type2有43株，占比為36.8%，Type3有71株，占比為60.7%，Type3型占比最多，為本研究中優(yōu)勢菌株。選取了上述3個(gè) Type型中的26株作為代表菌株，對(duì)其PmpF基因進(jìn)行了序列測定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，聚群結(jié)果與酶切聚樹結(jié)果一致。
　　326株代表菌株OmpI序列測定，結(jié)果顯示分別屬于D、Da、E、F、G

8、、H、J七種血清型。
　　4 X2檢驗(yàn)結(jié)果表明：年齡與PmpF基因Type型具有相關(guān)性，性別、科室分布與PmpF基因Type型沒有相關(guān)性。從年齡與PmpF基因Type型關(guān)系看，20歲以下患者中，Type2型最多，達(dá)到75%；20~30歲患者中， Type3型最多，占比為53.3%；30~40歲患者中，Type3型最多，占比高達(dá)82.9%；40~50歲患者中，Type3型也最多，占比為57.1%。
　　結(jié)論：
　　1從婦

9、科、泌尿科和皮膚科三個(gè)科室泌尿生殖道感染患者標(biāo)本中分離得到178株沙眼衣原體陽性標(biāo)本，感染主要發(fā)生在20～50歲之間，其中感染率最高的年齡段為20～30歲。
　　2感染的沙眼衣原體血清型為D、Da、E、F、G、H和J七種血清型，與已有報(bào)道結(jié)果一致。
　　3 Alu I、Hae III、Rsa I、Mob I四種內(nèi)切酶聚樹將117株沙眼衣原體分為3個(gè)Type型，Type3占比為60.7%，為本研究中優(yōu)勢Type型。基于系。

10、r>　　結(jié)果：
　　12013年1月至2014年12月從婦科、泌尿科和皮膚科三個(gè)科室獲得陽性標(biāo)本178株。178株陽性標(biāo)本中來自男性105個(gè)，占比為59%，來自女性73個(gè)，占比為41%；所有標(biāo)本中來自婦科58個(gè)，占比為32.6%，來自泌尿科88個(gè)，占比為49.4%，來自皮膚科32個(gè)，占比為18%；陽性標(biāo)本患者年齡分布為20歲以下8人，占比為4.5%，20~30歲之間為91人，占比為51.5%，30~40歲之間為59人，占比為33.

11、1%，40~50歲之間的為19人，占比為10.1%，50~60歲之間的只有1人，占比為0.6%。
　　2通過巢氏PCR，178個(gè)陽性標(biāo)本中有117個(gè)標(biāo)本擴(kuò)增獲得PmpF基因，根據(jù)4種內(nèi)切酶酶切圖譜可以分為3個(gè)Type型，依次為Type1、Type2、Type3。3個(gè)Type型中，Type1有3株，占比為2.6%，Type2有43株，占比為36.8%，Type3有71株，占比為60.7%，Type3型占比最多，為本研究中優(yōu)勢菌株。選

12、取了上述3個(gè) Type型中的26株作為代表菌株，對(duì)其PmpF基因進(jìn)行了序列測定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，聚群結(jié)果與酶切聚樹結(jié)果一致。
　　326株代表菌株OmpI序列測定，結(jié)果顯示分別屬于D、Da、E、F、G、H、J七種血清型。
　　4 X2檢驗(yàn)結(jié)果表明：年齡與PmpF基因Type型具有相關(guān)性，性別、科室分布與PmpF基因Type型沒有相關(guān)性。從年齡與PmpF基因Type型關(guān)系看，20歲以下患者中，Type2型最多，達(dá)到75%；20

13、~30歲患者中， Type3型最多，占比為53.3%；30~40歲患者中，Type3型最多，占比高達(dá)82.9%；40~50歲患者中，Type3型也最多，占比為57.1%。
　　結(jié)論：
　　1從婦科、泌尿科和皮膚科三個(gè)科室泌尿生殖道感染患者標(biāo)本中分離得到178株沙眼衣原體陽性標(biāo)本，感染主要發(fā)生在20～50歲之間，其中感染率最高的年齡段為20～30歲。
　　2感染的沙眼衣原體血清型為D、Da、E、F、G、H和J七種血清型，