混合模式吸附層析分離豬血免疫球蛋白研究.pdf

1、本文將新型的混合模式吸附層析應(yīng)用于豬血免疫球蛋白的分離純化?；旌夏Ｊ轿綄游鼋Y(jié)合了靜電與疏水相互作用，吸附容量大，具有非鹽依賴的吸附特性，在高鹽和低鹽條件下都可以高效吸附目標蛋白。一般可以通過調(diào)節(jié)pH，改變蛋白質(zhì)和/或吸附劑的所帶電荷，利用靜電排斥作用協(xié)助洗脫。我國年產(chǎn)豬血100多萬噸，目前大部分廢棄，造成資源的嚴重浪費和環(huán)境污染。豬血中富含蛋白質(zhì)，其中免疫球蛋白高達2％，具有抗菌、抗病毒等生物活性。開發(fā)合適的分離工藝，實現(xiàn)豬血蛋白的高

2、效經(jīng)濟分離，變廢為寶，具有重要的意義。
　　 首先考察了不同沉淀法分離豬血漿中的纖維蛋白原，包括凍融法、乙醇法、聚乙二醇法和硫酸銨法，比較發(fā)現(xiàn)硫酸銨法簡單易行，成本低，周期短，分離纖維蛋白原效果好。無需調(diào)節(jié)血漿pH，用20％飽和度的硫酸銨溶液沉淀分離豬血漿中的纖維蛋白原，離心后的上清液中富含免疫球蛋白，便于后續(xù)分離。
　　 考察了商品混合模式吸附介質(zhì)MEP-HyperCel對豬血免疫球蛋白的吸附性能，包括靜態(tài)吸附平衡和吸

3、附動力學，研究了pH和鹽濃度對吸附的影響，確定了合適的上樣和洗脫條件，從硫酸銨沉淀的上清液中直接分離免疫球蛋白，純度達到77.4％，得率為11.5mg/ml血漿。
　　 進一步研究了實驗室自制的3種親硫性混合模式吸附劑(Cell-TuC-DVS—MMI，Cell-TuC-DVS-MEP和Cell-TuC-DVS-MBI)對豬血免疫球蛋白的吸附性能。研究發(fā)現(xiàn)，pH是影響吸附的關(guān)鍵因素，Cell-TuC—DVS-MMI吸附容量比較大

4、，對pH敏感，吸附選擇性較好，適合于分離豬血免疫球蛋白。優(yōu)化了層析分離條件，以硫酸銨沉淀的上清液為料液，pH5平衡上樣，pH7洗脫去除雜蛋白，pH3.8洗脫得到豬血免疫球蛋白，電泳分析純度達到94.3％，純化倍數(shù)為5.6。
　　 本文實現(xiàn)了硫酸銨鹽析和混合模式吸附層析的有機結(jié)合，利用硫酸銨沉淀分離纖維蛋白原，沉淀上清液無需處理，直接利用混合模式吸附層析分離，得到純度較高的豬血免疫球蛋白。本文工作為豬血資源的綜合開發(fā)利用提供了新方